pamam介导皮抑素基因治疗裸鼠人子宫内膜异位症模型的实验研究.pdfVIP

中III大学硕Ij学论文PAMAM介导内皮抑素基因治疗裸鼠人子宫内膜异位症模型的实验研究 PAMAM介导内皮抑素基因治疗裸鼠人子 宫内膜异位症模型的实验研究 学科专业：妇产科学 学位申请人：张红霞 导师姓名及职称：王宁宁副主任医师 中文摘要 研究背景 病，患病率高达10-15％，其特点是子宫内膜腺体或间质生长在子宫腔以外的部 位出现，生长，浸润，反复出血，或者引发疼痛，不育及包块。内异症在病理上 虽属良性疾病，但具有恶性肿瘤侵袭和转移的特性，是一种严重困扰女性的难治 之症。目前有很多方法可以治疗内异症，但结果并不满意，除实行根治性手术外， 传统的药物和保守手术等治疗方法存在较大的副作用和较高的复发率，因此寻求 新的治疗措施十分重要。本论文通过成功建立裸鼠人子宫内膜异位症模型，分别 病灶局部注射给药方式将ES基因转染至裸鼠人子宫内膜异位症模型，通过观察 异位病灶体积及重量的变化及转染后异位病灶组织ES及血管内皮生长因子 (Vascularendothelial growthfactor，VEGF)的表达以及微血管密度 新生过程及已生成血管的抑制作用，同时对裸鼠心脏、肝脏、肾脏及内生殖器的 进行组织病理观察，了解其副作用。论文将分为裸鼠人子宫内膜异位症模型的建 立，PAMAM介导ES基因转染裸鼠人子宫内膜异位症模型的疗效观察两部分进行 阐述。 中IJI大学硕1：学论文PAMAM介导内皮抑素基因治疗裸鼠人子宫内膜异位症模型的实验研究 研究目的 本研究通过比较皮下移植及皮下注射两种不同的方法建立裸鼠人子宫内膜 异位症模型，为研究EMs提供更好的建模方式。进一步借助裸鼠人EMs模型，进行 PAMAM介导ES基因治疗，比较不同时问点用药对异位病灶的抑制作用及其副作用， 为国内外该领域的研究提供重要的实验资料。 研究分两部分： 第一部分不同方法建立裸鼠人子宫内膜异位症模型 材料与方法： 取自子宫腺肌症患者，年龄为42—47岁，行全子宫切除后刮取子宫内膜，分别 以皮下移植内膜块和皮下注射内膜碎屑的方法建立裸鼠人子宫内膜模型，自术后 第三天起，每隔三日用游标卡尺测量异位病灶长、宽，按公式计算病灶体积。建 模后2周，4周脱颈椎处死裸鼠，取病灶行HE染色，VEGF及FⅧ检测。 结果： 1．测量病灶体积变化及生长曲线：移植组病灶体积随着时间的推移逐渐增 大，种植后2周左右达到高峰，以后缓慢缩小至平台期；注射组体积呈下降趋势， 种植后2周至平台期。在相同时间点(2周或4周)，两组异位病灶体积相比差 别无统计学意义(乃0．05)，而两组异位病灶重量相比有统计学意义(PO．05)。 2．病灶成活率比较，在相同时间点(2周或4周)，两组异位病灶成活率和 裸鼠累积存活率相比差别无统计学意义(乃O．05)。 3．移植组和注射组，2周时病灶腺体中VEGF表达明显增高，与4周时比较 有显著性差异(尸0．05)，^l、，D明显增多，与4周时比较有显著性差异(尸0．05)。 而2周和4周时，移植组病灶腺体和间质中VEGF表达、MVD与注射组比较差别 无统计学意义(P0．05)。 巾IJI大学硕I：学论文PAMAM介导内皮抑素基因治疗裸鼠人子宫内膜异位症模型的实验研究 第二部分PAM蛐介导内皮抑素基因抗血管生成治疗裸鼠人子宫内膜 异位症的实验研究 材料与方法： 取自子宫肌瘤患者，年龄为42—49岁，行全宫切除后刮取内膜，以皮下移 植内膜块的方法建立裸鼠人子宫内膜模型，首先随机分为I组，即建模后第l天 病灶局部注射P舳㈣介导Es基因20ug治疗一次和II组，即建模后第14天病灶 组、生理盐水组及空白组四个亚组。每日观察裸鼠的精神，活动及大小便情况， 每隔三日用游标卡尺测量异位病灶长、宽，按公式计算病灶体积。给药后1周脱 颈椎处死裸鼠。通过病灶称重，并且行HE染色，ES、VEGF、FⅧ检测对疗效进 行评估。通过对裸鼠心脏，肝脏，肾脏进行大体观察及HE染色，裸鼠卵巢、子 宫称重、HE染色，卵泡计数进行副作用评估。 结果： 1．免疫组化SP法测定转染后四组异位病灶组织中ES、VEGF以及MVD的表达。 (1)在I组中，ES转染组腺体中Es表达明显增高，与三对照组