wntβ-caenin信号通路功能低下在糖尿病合并创面难愈中的作用.pdf

i Wnt／p-catenn信号通路功能低下在糖尿病合并创面 难愈中的作用 摘 要 目的：糖尿病患者皮肤易受损伤，损伤后创面愈合延迟或不愈合。在 糖尿病人群中足部溃疡的发生率为2％，糖尿病患者一生中的15％会罹患此 并发症。糖尿病溃疡预后较差，3年生存率在50％左右。既往研究认为，糖 尿病合并创面难愈的因素主要集中在以下几方面：①糖代谢紊乱及晚期糖 基化终末产物增多；②微血管改变；③基质金属蛋白酶(matrix 长因子受体的改变；⑤表皮细胞增殖障碍。而目前基于以上机制用于治疗 糖尿病溃疡的药物均未成功， platelet—derivedgrowthfactor)疗效较好。创面愈合过程中任何一个环 节不协调或功能障碍均可导致创面愈合失控。目前关于糖尿病创面难愈的 机制仍未阐明。Wnt细胞信号转导途径是调控细胞生长、发育和分化的关 键途径。此信号途径中的关键因子B-catenin稳定性以及其在细胞内的位 置受到一系列正性调节因子和负性调节因子的调控，其调控异常可导致 Wnt信号通路的抑制或异常激活，从而产生基因表达、细胞黏连、发育方 面等一系列异常，并与癌症发生、转移密切相关。Wnt信号途径与PGE2／EP2 表达增强，表皮细胞的增殖、分化和迁移能力增强，且创面愈合加快；皮 肤角质化细胞Wnt信号途径影响创伤后皮肤的厚度及色素沉着；Wnt信号 途径参与保护高糖导致的血管内皮细胞的损伤；B-catenin调控异常可以 调能提高高糖抑制的肾系膜细胞的活性；高糖通过P13K—Akt信号途径抑制 周期素D1表达减弱。从这些间接资料推测出，糖尿病的创面难愈与Wnt／ B-catenin信号通路功能紊乱有关。因而，本研究拟对此进行探讨。方法： 1．糖尿病难愈创面大鼠模型的建立：①1型糖尿病大鼠模型的建立：选择3 糖进行测定， 注射3d后动物血糖浓度16．65mmol／L判定为1型糖尿病 动物模型。②制作大鼠背部皮肤缺损：取上述人工复制的糖尿病大鼠60 只和正常大鼠20只，以3％戊巴比妥钠(25mg／kg)腹腔推注麻醉后，背 部剃毛，常规消毒。在无菌条件下用特制打孔器在鼠背中部脊柱两侧各打 一圆孔，深至皮下，直径1．8cm，创面面积为2．54am2。止血后以无菌纱 布包扎，换药1次／天，单笼喂养，定量饮水与喂食。所有实验均在清洁级 动物实验室完成；2．处理对照组与实验组：本实验分为正常组、糖尿病组、 糖尿病+氯化锂组、糖尿病+EGF组，共四组，每组各20只大鼠，①正常组 及糖尿病组，正常喂养，记录每日饮水量、进食量、尿量及体重变化；② 糖尿病+氯化锂组，除同上处理外，白糖尿病大鼠背部皮肤缺损模型制作成 面，凡士林纱布、无菌纱布及绷带包扎固定，每日以相同方法换药一次； ④伤后3d、7d检测各组创面细菌学变化(每平方厘米创面菌落数的常用对 数)，以排除细菌因素对创面修复的延迟作用；3．观察背部创面愈合情况： ①创面形态学描述：湿润度、颜色、分泌物、形状、创缘及50％创面愈合 时间；②创面面积：伤后即刻及3、7、14d用透明膜覆盖创面沿创缘画膜， 剪膜，置分度值为0．1mg的分析天平称重换算成面积，并计算创面愈合率； ⑧伤腔容积：伤后即刻及3、7d用1ml注射器向伤腔内滴注生理盐水， 2 d 至液面与创缘皮肤相平为止，记录注入量；④组织病理学检查，伤后14 取创面组织HE染色，以成纤维细胞增生、毛细血管增生、表皮增生为指标 组织化学方法。判定标准：在lO×20倍显微镜下随机观察10个视野，每 个视野计数100个细胞，免疫组化阳性信号为棕黄色颗粒状，观察阳性信 号的染色强度、部位并计算阳性细胞数。按照Maruyama等的方法，观察B —catenin在细胞膜、细胞质、细胞核三个部位的表达强度判断，细胞膜70％ 阳性为正常表达，反之为表达缺失，细胞质或细胞核10％阳性为异位表达， 细胞膜正常表达视为B—catenin阴性，细胞膜表达缺失或出现异位表达视 时间糖尿病各组间差异无显著意义，符合模型制作标准；2．正常组大鼠每 日饮水量、进食量及尿量均较糖尿病三组大鼠少，体重增加变化较糖尿病 组大鼠明显，差别有统计学意义；糖尿病各组大鼠无统计学差异；3．伤后