抑制端粒酶活性胶质瘤细胞增殖及凋亡影响作用机制的研究.pdfVIP

天津医科大学博士研究生论文 抑制端粒酶活性对胶质瘤细胞增殖及凋亡影响 作用机制的研究 中文摘要 【目的】 对人TJ905胶质母细胞瘤细胞系(TJ905细胞)端粒酶活性的抑制作用，以及 抑制端粒酶活性后对TJ905细胞增殖和凋亡的影响。检测抑制端粒酶活性能否 上调TJ905细胞抑癌基因生长抑制因子1(Ihibitor1，INGI)的表达， ofgrowth 分析TJ905细胞的INGl基因表达变化与其增殖活性和凋亡程度的相互关系。 旨在探讨抑制端粒酶活性后对恶性胶质瘤细胞增殖和凋亡影响的下游作用机 治疗恶性胶质瘤的效果和应用前景。最终目的是进一步加深对恶性胶质瘤发生、 发展机制的认识，为以端粒酶为靶点进行恶性胶质瘤化学药物靶向治疗的可行 性提供客观的实验依据。 【方法】 随机分为四组：对照组、AZT 509M组、AZT100“M组、AZT200pM组。常规 amplification 活性的变化；以细胞集落形成实验评价AZT对TJ905细胞增殖活性及生长速度 细胞增殖和诱导其衰老凋亡的作用；以流式细胞术(FCM)、单细胞凝胶电泳分 cell horesis 析法(singlegelelectrop AZT对TJ905细胞凋亡和细胞周期的影响；采用逆转录PCR(reverse transcript mRNA 天津医科大学博士研究生论文 的表达变化。 【结果】 端粒酶活性检测结果显示，各用药组端粒酶活性均明显低于对照组，AZT 酶活性，其抑制作用呈现剂量依赖性。 细胞集落形成实验结果证实，三个用药组TJ905细胞的克隆形成率均低于对 200rLM组的克隆形成率低于AZT 照组(PO．01)，AZT 501aM组及AZTS00,M组 (P0．01)，差异均有显著性。免疫细胞化学检测结果显示，各用药组第六代TJ905 显著性。以上结果说明AZT可通过抑审1]TJ905细胞的端粒酶活性，有效的抑制其 增殖活性和诱导其成熟分化。 单细胞凝胶电泳检测结果显示，各用药组TJ905细胞在第一代时彗星拖尾细 胞(凋亡细胞)的数量即有增加，凋亡指数(AI％)高于对照组，有显著性差 异(P0，01)；在第六代时DNA切割进一步加重，凋亡细胞彗星拖尾的尾矩明显 延长。TUNEL检测结果显示，各用药组TJ905细胞在第一代时凋亡指数与对照 组相比即增加，并有显著性差异(PO．01)；传代培养至第六代时，各用药组的凋 亡指数均较第一代升高，且第六代的AZT 100p．M组的凋亡指数 2009M组及AZT 均高于AZT 50／．tM组，差异有显著性(P0．01)，与单细胞凝胶电泳检测结果趋势 相同。流式细胞分析显示，各用药组的TJ905细胞在第一代即可出现凋亡峰，但 凋亡率比较低；传代培养至第六代时再次出现明显的凋亡峰，凋亡率达29％。 以上结果说明AZT可通过抑带lJTJ905细胞的端粒酶活性，有效的诱导其凋亡。尽 管在二～五代未见明显的凋亡峰，但细胞周期的分布发生了改变，与对照组相比 较，各用药组TJ905细胞的G0／G!期细胞比例增多，s期细胞比例减少，说明在 此期间AZT还可通过阻滞TJ905细胞由G0／G1向s期过渡抑制其增殖。 经RT-PCR检测发现，各用药组TJ905细胞P33。NGlb mRNA的相对灰度值 II