抗人stathin蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及对人肝癌细胞的生长抑制作用.pdf

硕士学住论文 及对人肝癌细胞的生长抑制作用 硕士研究生：原少斐 指导教师：汪森明 李明 摘 要 原发性肝癌(PrimaryHepatic 的肿瘤之一，发病率在恶性肿瘤中位居世界第5位，死亡率位居第3位Il】。我国由 于大量慢性乙型肝炎感染人群的存在，目前原发性肝癌仍是我国高发的重大疾 病，其发生率约为30．3／10万，每年约有14万人死于PHC，占全世界PHC死亡人数 的50％以上【2】。肝癌由于起病隐匿、进展迅速，临床治疗效果仍然较差。目前， 肝癌的I临床诊断并不困难，但临床发现的大多数病例属于中晚期。针对肝癌的各 种治疗手段包括外科治疗、肝动脉／lq静脉化疗栓塞术、消融治疗及放射治疗等 均有一定的效果，利用各种治疗手段对肝癌患者进行综合治疗是目前肝癌治疗的 趋势。 20世纪后期人们开始用系统生物学观点来研究肿瘤，认识到肿瘤是一种多 因素参与、多步骤发展的全身性、系统性疾病。引发癌基因突变、抑癌基因缺 失或基因表达调控失常引起肿瘤基因组稳定性丧失，进而导致肿瘤细胞出现异 常的生物学行为。分子靶向治疗指使用小分子化合物、单克隆抗体、多肽等物 质特异性干预调节肿瘤细胞生物学行为的信号通路，从而抑制肿瘤发展。分子 靶向治疗在本质上有别于传统的化学治疗，分子靶向治疗针对肿瘤异常的信号 ‘通路，具有高选择性、低毒性和高治疗指数，可以长期用药【31。 细胞分裂时，染色单体在纺锤体上的运动依赖于微管的动力不稳定性，微 管调节蛋白表达的紊乱可以破坏有丝分裂、中止恶性细胞的生长。Stathmin是一 种新发现的微管不稳定蛋白，在细胞周期的不同阶段通过磷酸化和去磷酸化作 中文摘要 用对细胞微管系统动力平衡的调节发挥十分重要的作用。多种恶性肿瘤中 stathmin都有高水平表达，通过抑制其表达可以干扰恶性细胞的分裂。研究表明， stathmin提供了一个肿瘤基因治疗的分子新靶点【4J。 Stathmin是从淋巴瘤中筛选出的特征性基因的表达产物，由149个氨基酸组 成，分子量约19kD，在脊椎动物细胞中普遍存在、高度保守的胞质磷蛋白【51。 信号转导研究显示：细胞内、外有多种细胞因子、癌基因及抑癌基因表达产物 作用底物，其下游作用靶点则是在细胞分裂周期中起关键作用的微管蛋白、微 管及纺锤体等细胞器。通过调节微管系统的动力学平衡，stathmin可以控制细胞 周期，并以此改变细胞的增殖、分化、活性等生物学行为161。Stathmin促微管解 聚的活性受其自身磷酸化水平的调节，相对于细胞间期，有丝分裂期stathmin磷 酸化水平显著增高，其氨基末端的四个丝氨酸经细胞周期素依赖激酶、有丝分 裂原活化蛋白激酶、钙调蛋白依赖激酶和cAMP依赖激酶等蛋白激酶作用磷酸化 【51。研究证实，诱导野生型stathmin过表达将导致细胞间期微管解聚。当这些细 胞进入有丝分裂早期，stathmin经磷酸化失活，从而使微管蛋白聚合及纺锤体装 配。有丝分裂晚期stathmin的去磷酸化对于纺锤体的解体和退出有丝分裂是必需 管不能够聚合并形成有功能的纺锤体【7J。这些研究结果表明stathmin的磷酸化失 活对纺锤体的形成和细胞周期的进行是至关重要的。 Stathmin的高水平表达可以在白血病、淋巴瘤、前列腺癌、卵巢癌、肺癌、 肝癌、成骨肉瘤、乳腺癌等多种肿瘤中检测到。Alli等【8】发现含有突变型p53基因 癌基因介导的转化对stathmin表达水平的影响，推测在肿瘤细胞中经常观测到 stathmin的高水平表达仅仅是肿瘤细胞增殖活动增强的一种反映。其后的研究证 实，stathmin的高水平表达对于维持肿瘤细胞的高增殖率是必需的【91。通过妨碍 微管功能抑制细胞分裂的药物目前已广泛应用于肿瘤的化疗，紫杉醇和长春碱是 此常用的两种化疗药物。研究证实stathmin的过表达与肺癌细胞对长春地辛敏感 II 硕士学位论文 相关，可作为肺癌患者对长春碱类药物敏感的标志【lol。Balachandran等㈣证实紫 杉醇(泰素)与抗stathmin核酶联合治疗可以提供一种更有效、低毒的肿瘤治疗手 段，从而大大减轻多种化疗药