nf-κb在实性暴发性肝衰竭肝细胞炎症损伤中的作用及其机制.pdfVIP

中文摘要 NF-KB在实验性暴发性肝衰竭 肝细胞炎症损伤中的作用及其机制 接 要 Hepatic 目的；暴发性肝衰竭(Fulminant 由于多种原因所引起的肝细胞大量坏死而出现的以肝功能 严重受损为特征的综合征。具有起病急、预后差及病死率高 的特点，迄今仍无有效治疗，国外报导病死率在40--70％llj， 国内经过连续攻关报导仍为50％左右【2J，降低病死率是临床 工作中迫切需要解决的难题。虽然近年来在暴发性肝功能衰 竭的发病机制、临床诊断、治疗等方面取得了较大进展，但 其发病机制仍不甚明确，若能迸一步明确其发病机制必将提 高FI-[F的防治水平。 目前国内外对于暴发性肝衰竭发病机制的研究强调内 毒素引起的触发作用。最近的研究证明内毒素等的毒性作用 主要是间接性的，它依赖于许多炎症介质的释放，特别强调 细胞因子的作用，其中TNF--旺起着关键作用pl。临床和基础 研究都明确观察到在暴发性肝炎所致肝功能衰竭患者血清 141。研究认为内毒素进入肝脏激活单核，巨噬细胞系统，引 起n忭吨为中心的多种炎症介质的释放，介导炎症反应的 瀑布效应造成肝细胞坏死。 NF-rdB是一个多级转录因子，它调控一系列基因的表 达，如编码炎性细胞因子、趋化因子、干扰素、MHC蛋白、 生长因子、细胞粘附因子的基因和病毒基因，与机体免疫、 中文摘要 炎症等病理生理过程密切相关嘲。调控合成与炎症反应有关 的蛋白质的细胞因子主要有：前炎性细胞因子：TNF--{1、 IL．8、巨噬细胞炎性蛋白．1、巨噬细胞趋化蛋白一l；炎性反 应酶类；粘附分子：细胞间粘附分子．1、血管细胞粘附分子 ．1、E．选择素；受体：IL-2受体、T细胞受体(昼链)。它们 大多参与机体的炎症反应；可促进炎症细胞积累、活化或炎 症介质的释放，加重炎症反应。 介导过度炎症反应的核心环节。国内外对于NF．r．B的研究 多集中于肿瘤和缺血再灌注方面，而对其在暴发性肝衰竭肝 细胞炎症损伤中的作用及机制研究较少。本研究基于上述理 论，旨在用免疫组织化学方法检测NF．r,B在FHF病理损害 过程中表达的变化，以期证实NF-r．．B在暴发性肝衰竭中的 作用，进一步阐明暴发性肝衰竭的发病机制。 方法：1．研究对象：雄性清洁级Wistar大鼠45只，体 重180．2009。将大鼠随机分为模型组30只，对照组15只。 模型组腹腔注射D．氨基半乳糖800mg／kg，之后立即皮内注 射脂多糖10rtg／kg，制造暴发性肝衰竭模型。对照组腹腔注 射同样体积的生理盐水。2．标本的采集和保存：分别于注 药后2，4，8，12，24小时行股静脉放血处死，各时间点取 模型组6只，对照组3只大鼠。留取血清，放血处死后立即 剖腹取肝脏，取适量肝组织经10％中性甲醛溶液固定，余 经液氮速冻后置．80℃冰箱保存备用。3．肝组织标本采用常 规HE染色：光镜下观察肝组织病理学改变，观察炎症、坏 死的形成与发展。4．肝组织标本的免疫组织化学染色：采 中文摘要 用常规免疫组化S．P法，对肝组织标本进行NF．KB、iNOS Shimizul8】等判定标准采用半定量方法，分别按染色细胞的 分布和染色深度记分，最终结果用阴性、弱阳性、阳性、强 阳性来表示。5．应用SPSS11．0统计软件进行统计学分析， 所有计数资料均采用等级表示，各指标不同时间点间统计分 析用Wilcoxon秩和检验及秩相关分析。两指标间的相关性 用秩相关进行分析。P0．01时有显著性差异。 结果：1．各组动物一般状况观察：对照组大鼠一般状 况较好，无死亡。模型组随着给药后时间的延长，大鼠一般 状况逐渐恶化，依次出现饮水减少、毛发竖立、精神萎靡、 反应迟钝、嗜睡，1l小时死亡1只大鼠。2．各组肝组织形 态学大体观察：(1)肝脏大体标本观察：对照组不同时间点， 肝组织形态学差异不大，大鼠肝脏呈鲜红色，光泽好，质地 柔软有弹性，边缘锐利。模型组肝脏组织随时间延长出现充 血、出血点、局部淤血、坏死，肝组织脆性增加及大块坏死。 (2)肝组织HE染色：对照组不同时间点，肝组织形态学差异 不大，肝小叶结构完整，肝板排