stat1在gcsf诱导异基因造血干细胞移植供者t细胞免疫耐受中的作用.pdf

中文摘要 细胞产生免疫耐受中的作用 摘 要 目的：临床实践表明应用G．CSF作为干细胞动员剂进行的 外周血造血干细胞移植，其急性移植物抗宿主反应并不比传 统的骨髓移植高。这说明G．CSF存在着诱导免疫耐受的作用。 G．CSF可以从T细胞分化、树突状细胞(DCs)、单个核细胞、 调节性T细胞等角度对干细胞移植物的免疫功能进行调节， 诱导移植物中的T细胞产生免疫耐受。目前的观察表明， 等)显著增多，这一现象在诱导免疫耐受中起着至关重要的 作用。但是，目前对T细胞上是否存在G．CSF受体仍存在很 大的争议，因此G．CSF能否直接对T细胞产生作用仍不肯定。 JAK．STAT信号转导途径作为机体内非常重要的信号转 导途径之一，在机体免疫功能的形成与发挥作用中有重要的 作用。这一途径参与体内多种病理生理过程，调节体内众多 基因的表达，约有50余种细胞因子通过其进行信号传导。因 此，它对机体各种生理功能的维持及对外界刺激做出正确的 反应是非常重要的一环。其中，STATl作为Thl型细胞因子 重要的信号转导因子，在IFN．补IL．2引起的基因转录过程中 居于核心地位。并且很多学者已经证实STATl是GVHD重要 的调控点。但到目前为止，尚没有研究对STATl在G．CSF诱 导的免疫耐受中的变化进行过检测。因此本实验在G．CSF诱 中父摘要 导免疫耐受过程中，检测Thl型细胞及Th2型细胞的数量及比 平的变化，并对其作用进行初步探讨，以进一步加深对G．CSF 诱导免疫耐受机制的了解、为对其进行调控打下基础。 方法： 1 收集标本：分别留取23位骨髓移植供者应用G．CSF动员前 及应用G．CSF动员3天后的外周血标本10ml，使用肝素抗 凝。 2分组：共分为两组，即供者应用G．CSF动员前的外周血标 本和供者应用G—CSF动员后的外周血标本，为配对标本。 3 应用免疫磁珠分选法分选CD4+T细胞：从采集的外周血标 本分离出单个核细胞后，再应用免疫磁珠分选的方法分 离CD4+T细胞并提纯，最后用流式细胞仪检测CD4+T细 胞的纯度并计数。 4 流式细胞技术检测G．CSF动员前及G．CSF动员后的 CD4+T细胞中Thl、Th2的数量及Thl／Th2L匕值。 5 提取RNA，并逆转录为cDNA。 6应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real．time Quantitative 7将纯化的CD4+T细胞进行细胞培养，并在培养过程中加 入不同浓度的G．CSF束IJ激，观察其刺激T细胞增殖的作 用。 取RNA并逆转录为cDNA． 中文摘要 9 结果： 降低。 CD4+T细胞的数量和占单个核细胞的比例均增加。 因的表达均有变化，但经统计学处理，均没有统计学意 义。 可以刺激分离后的CD4+T淋巴细胞增殖，这种作用达峰 指数未见明显的增加。 5 出现下降。 结论： 中文摘要 CD4+T淋巴细胞会向Th2方向分化，这可能诱导了免疫耐 受的产生。 可以因G．CSF的刺激作用而出现增殖。 刺激分离后的CD4+T淋巴细胞增殖。这种作用12．24小时 达到高峰，48小时后开始下降，72小时后消失。G．CSF 最适刺激浓度以200ng／ml。 达的增高，这可能与体内、外环境的差异，以及体内G．CSF 浓度处于较低水平且浓度不稳定有关。 显。而在体外培养应用G．CSF后GATA．3出现明显的升高 同时T-bet则明显降低，这可能与体内外的环境差异有关。 6 STATl在体内应用G—CSF动员后并没有减低，但在体外培 外环境的差异、体内信号转导途径上复杂的网络联系和 STATl在维持Treg细胞的产生及发挥正常作用是必需的 有关。目前关于这方面的研究较少，要明白其确切作用 及机制，仍需要大量的研究。