急性髓系白血病骨髓增生异常综合征fancffancd2表达的研究.pdf

·中文论著摘要· 急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征 FANCF／FANCD2表达的研究 摘要 范可尼贫血(Fanconianemia，FA)是一种常染色体隐性遗传性疾病，以染色体 不稳定，细胞对DNA交联剂如丝裂霉素C、顺铂高度敏感为特征，并且高度易患 癌症，主要包括急性髓系白血病(AML)，头颈部鳞状细胞癌，妇科癌症等。目 M和№，其中12种FA基因已被克隆出来，它们通过共同途径组成一个多蛋白 核心复合物，在FA通路中发挥重要作用，这也是FANCD2蛋白单泛素化所必须 的。FANCF蛋白是范可尼贫血蛋白互补基团的重要成员之一，FANCF作为一种 重要的衔接蛋白，参与FA复合体的稳定及FANCD2泛素化激活过程，因此是维 持FA通路功能所必需的重要蛋白。FANCF通过FA通路，参与细胞周期的调控、 细胞凋亡、DNA的修复、基因转录与基因稳定性等多种生命信号的转导与调控。 FANCF蛋白低表达及功能缺失与FANCF基因启动子超甲基化相关。目前，已在 多种肿瘤(卵巢癌，口腔癌，肺癌和宫颈癌)中证实FANCF蛋白低表达或功能缺失 征(MDS)中的研究国内尚未有报道。本实验拟通过检测FANCF基因的甲基化 关系，为治疗提供新的策略。 材料和方法 一、研究对象 2007年9月份至2008年7月份中国医科大学附属第一医院血液科就诊的 13例，RAEB．T 例、RAS 15例)28例，中位年龄67 10例)18例，高危组(RAEB 岁，男女比例l：l。对照组42例，为巨幼细胞贫血、缺铁性贫血或血小板减少性 紫癜患者。诊断符合FAB诊断标准。 二、方法 (1)密度梯度法提取骨髓单个核细胞。 (2)酚．氯仿．酚反复离心法抽提DNA。 (3)MS．PCR检测FANCF基因的甲基化状态。 (4)免疫组织化学染色法检测FANCF、FANCD2蛋白。 (5)Western印迹法检测FANCF、FANCD2蛋白。 (6)统计学方法：用SPSSl3．0统计软件处理分析，计量资料采用非参数检验中的 Kruskal．Wallis秩和检验，计数资料用X2检验，描述性分析采用中位数(Ⅶ。 实验结果 一、AMLFANCF基因甲基化状态 初诊的AML患者甲基化程度高于对照组和CR组AML患者，两组比较差异 和对照组比较有统计学意义(PO．05)；CR组AML患者与对照组比较，甲基化状 态差别无统计学意义(P0．05)。 二、AML必LNCF、FANCD2蛋白的表达 显示初诊组表达率31．2％，CR组表达率77．8％，复发组表达率30．0％，对照组表 达率95．2％。初诊组与对照组、CR组表达率比较，两组数据有统计学意义(PO．01)； 复发组与初诊组比较无统计学意义(PO．05)，与CR组和对照组比较有统计学意 组表达74．1％，复发组表达率35．0％，对照组表达率88．1％。初诊组与对照组、CR 2 组表达率比较，两组数据有统计学意义(PO．01)；复发组与初诊组比较无统计学意 无统计学意义(P0．05)。 三、MDSFANCF基因甲基化状态 MDS患者高危组和低危组均表现出高甲基化状态，与对照组的差异有统计学 意义(P0．01)；MDS患者高危组甲基化程度高于低危组，两组比较有统计学意义 (P0．05)。 四、MDS FANCF、FANCD2蛋白的表达 免疫组织化学检测显示FANCF蛋白在MDS低危组表达率5．6％、高危组表达 危组表达率7．1％，对照组表达率95．2％，MDS病例组与对照组比较均有统计学意 组表达率7．1％，对照组表达率71．4％；Western印迹法检测显示低危组表达率 22．2％，高危组表达率10．7％，对照组表达率88．1％，MDS病例组与对照组比较均 有统计学意义(P0．05)。 耋口结 论F匕： 本研究显示AML患者组FANCF基因甲基化状态显著高于对照组，且初治 程中起到一定的作用。FANCF蛋白在对照组中高表达，初诊和复发