青蒿琥脂对骨髓胞株rpmi8226增殖、凋亡、侵袭影响的研究.pdfVIP

中文摘要 l 8226 青蒿琥脂对骨髓瘤细胞株RPM 增殖、凋亡、侵袭影响的研究 摘 要 目的：多发性骨髓瘤(Multiple 胞呈恶性克隆增殖性肿瘤。多发性骨髓瘤约占所有恶性疾病 的1％，血液系统恶性疾病的10％。患者多为老年人，男性 的平均发病年龄为69岁，女性的平均发病年龄为71岁，只 有不到5％的病人发病年龄小于40岁。在过去的30年中， 85岁以上的多发性骨髓瘤的病例增加(与1968年相比，85 岁以上的多发性骨髓瘤的患者已经增长了45％)，多发性骨 髓瘤的死亡率也有所增加。鉴于我国目前的实际情况，大多 数患者由于经济方面和观念方面的原因，不能接受治疗效果 较好的自体造血干细胞移植，许多病人也负担不起蛋白酶体 抑制剂硼替佐米的高额费用。青蒿琥脂是一类高效、低毒的 抗疟药物，并且副作用较小。近期许多学者的研究发现青蒿 琥脂亦具有抗肿瘤活性。因此，在本研究中，我们进一步研 究青蒿琥脂对人骨髓瘤细胞系RPMI8226的增殖、凋亡、侵 袭的影响，探讨青蒿琥脂的抗骨髓瘤机制，以求为众多老年 多发性骨髓瘤患者提供更合适的治疗选择。 方法： 1．1细胞培养：RPMl8226细胞常规用RPMI1640培养液培 和环境下培养、传代，细胞呈70％．80％融合状态后换液。待 中文摘要 细胞进入对数生长期后进行相关实验。 8226细胞作用48小时的增殖抑制 50pg／ml青蒿琥脂对RPMI 率。以RPMll640为空白药物对照组，培养48小时后，MTT 实验检验增殖抑制，SAS8．0软件统计两者的药效区别。抑制 率(％)=(对照组A值．实验组A值)／对照组A值×100％。 1．3细胞形态学观察：分别在倒置显微镜下观察终浓度为 同时设立不加青蒿琥脂的空白对照组，观察细胞的数量及形 态学变化。 1．4 Buffer悬浮细 后，1×PBS洗涤2次后加入500pL的Binding 胞，加入lOI．tLAnnexin 下避光、反应15min，流式细胞仪检测细胞凋亡率。 1．5流式细胞术检测细胞周期分布：取对数生长期RPMl8226 终浓度为50 min。流式细胞仪测定细胞 u∥ml的PI染色30 周期分布，计算细胞周期变化。 1．6 力的影响。 于96孔板上。不同实验组的培养液中分别加入终浓度为 中文摘要 的条件下培养12h后，加入100p1 酶标仪检测各组细胞在405nm处的吸光度(A值)。 结果： 剂量依赖性，不同浓度的青蒿琥脂处理组间的A值相比较， 为36．47 u∥ml(LOGIT法计算)。 2．2青蒿琥酯对RPMl8226细胞形态学变化的影响 后，在倒置显微镜下观察发现RPMl8226细胞数明显减少、 细胞体积缩小、细胞碎裂等改变；而对照组细胞数量多、细 胞核较大、胞浆丰富。 2．3青蒿琥酯对RPMl8226细胞凋亡的影响 终浓度为50 用最明显，凋亡率最高可达68．1％±5．9，明显高于对照组。 2．4青蒿琥脂对RPMl8226细胞周期分布的影响 8226细胞 作用48小时后，流式细胞仪检测细胞周期变化的结果显示， 随青蒿琥酯浓度增加，细胞G0／G1期比例逐渐减少，G2／M 期比例逐渐增加。当青蒿琥酯的终浓度为50 ll∥ml时，G0／G1 期细胞比例由药物处理前的52．4±3．7降至21．4±2．5 中文摘要 加至54．3±4．2(尺O．05)。 2．5 的影响 2．5la 预实验中，选用1 g／ml浓度的