文冠果FAD2的序列与功能分析.pdfVIP

第37卷摇 第2期 北 京 林 业 大 学 学 报 Vol.37,No.2 2015年2月 JOURNAL OF BEIJING FORESTRY UNIVERSITY Feb. ,2015 DOI:10.13332/ ki.jbfu.2015.02.017 文冠果FAD2 的序列与功能分析 赵摇 娜摇 张摇 媛摇 李秋琦摇 李茹芳摇 郭惠红 (北京林业大学生物科学与技术学院) 摘要:脂肪酸脱饱和酶2(fatty aciddesaturase2,FAD2)基因是油脂合成代谢的关键酶基因,其编码的蛋白催化油酸 (18颐1)进一步脱饱和形成亚油酸(18颐2)。 本研究以富含油酸和亚油酸2种优质不饱和脂肪酸的文冠果种胚为试 材,采用简并引物策略结合RACE技术,克隆了文冠果FAD2 的cDNA序列。 序列分析表明,文冠果FAD2 除具有植 物FAD2特有的3个组氨酸区和N端的芳香族氨基酸区外,还具有3个 N—糖基化位点和多个磷酸化位点。 通过 农杆菌介导,将文冠果FAD2转入拟南芥fad2突变体中进行表达分析。 气相结果表明,拟南芥fad2 突变体缺失亚 油酸,而转入文冠果FAD2 的拟南芥fad2突变体的种子油中产生了亚油酸,这表明所克隆的文冠果FAD2基因编码 的酶具有催化油酸(18颐1)脱饱和成为亚油酸(18颐2)的活性。 关键词:文冠果;种子油;FAD2;序列分析;互补实验;功能分析 鄄鄄 鄄鄄 鄄鄄 中图分类号:S792郾11;S718郾43 摇 摇 文献标志码:A摇 摇 文章编号:1000 1522(2015)02 0087 07 ZHAO Na;ZHANG Yuan;LI Qiu鄄qi;LI Ru鄄fang;GUO Hui鄄hong. Sequence and functional analysis of FAD2 gene fromXanthoceras sorbifolia seeds. Journal of Beijing Forestry University (2015)37(2) 鄄鄄 87 93 [Ch,23 ref.]College of Biological Science and Biotechnology, Beijing Forestry University, Beijing,100083,P. R. China. 摇 摇 As a critical enzyme in the lipid biosynthetic pathway, fatty acid desaturase 2 (FAD2) is responsible for the desaturated conversion of oleic acid (18颐 1) to linoleic acid (18颐2). With the combination of degenerate PCR and RACE methods,a full鄄length cDNA of FAD2 fragment was cloned from the developingXanthocerassorbifolia embryosthat arerich inlinoleicacidandoleicacid. Sequence analysis revealedthatX. sorbifolia FAD2 hasthree N鄄glycosylation sitesand several phosphorylation sites in addition to three conserved histidine motifs and an aromatic