柱色谱实验.ppt

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柱色谱实验

柱色谱实验 一、实验目的 二、实验原理 柱色谱 操作过程 柱色谱分离过程(附) a. 试样溶解在最小体积的溶剂中,用滴管将试液加到吸附剂的上面; b. 试液加完并流到吸附剂上端时,立即加入展开剂进行展开,勿使溶剂的平面低于吸附剂的上端; c. 可用分液漏斗来代替连续不断地加洗脱剂。调节分液漏斗的活塞,溶剂慢慢滴下。直到水平面高于漏斗下端适当高度时,滴加停止或变缓慢。当水平面降到漏斗下端时,溶剂自动滴出或加快; d. 试样中的非极性组分很少被吸附,首先被洗脱出来,极性大的组分吸附较强,后被洗脱出来。 生命与环境科学学院 化学实验中心 1、学习并掌握色谱法的原理及其应用。 2、学习并掌握柱色谱的实验操作技能。 色谱法亦称色层法,层析法等,是分离,纯化和鉴定 有机化合物的重要方法之一。 色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中 的吸附或溶解性能(即分配)的不同,或其它亲和作用性 能的差异,混合物的溶液流经该种物质,进行反复的吸附 或分配等作用,从而将各组分分开。 柱色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两类。前者常用氧化铝或硅胶为吸附剂。后者以硅胶,硅藻土和纤维素为支持剂,以吸收大量的液体为固定相。当加入的洗脱剂流下时,由于不同化合物吸附能力不同,因而以不同的速度沿柱向下流动,继续洗脱时,吸附能力弱的组分随溶剂首先流出。在连续洗脱过程中,不同组分或不同色带就能分别收集,从而达到分离纯化的目的。 实物图 1 吸附剂 常用的吸附剂:氧化铝,硅胶,氧化镁,碳酸钙,活性炭或纤维素粉。 选择吸附剂的首要条件:不与被分离物或展开剂发生化学反应。 吸附能力与以下几点有关: (1)吸附剂颗粒大小 (2)吸附剂含水量 色谱法在有机化学中的应用主要包括以下几个方面: (1)分离混合物 (2)精致提纯化合物 (3)利用比移值(Rf)鉴定化合物 ( 4 ) 跟踪反应进程 2 溶剂 通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活性等来考虑。先将带分离的样品溶于尽量少的非极性溶剂中,从柱顶流入柱中,依次增大溶剂的极性,将不同化合物依次洗脱。 常用洗脱剂的极性: 石油醚< 环己烷< 四氯化碳< 甲苯< 苯< 二氯 甲烷< 氯仿< 乙醚< 乙酸乙酯< 丙酮< 乙醇< 甲醇< 水< 乙酸 (1)装柱 色谱柱的大小,取决于分离物的量和吸附物性质,一般的规格是柱的直径为其长度的1/10至1/4.实验中常用的色谱柱直径在0.5cm至10cm之间。 装柱要求吸附剂必须均匀地填在柱内,没有气泡、没有裂缝,否则将影响洗脱和分离。通常采用糊状填料法,即把柱竖直固定好,关闭下端活塞,底部用少量脱脂棉或玻璃棉轻轻塞紧,加入约1cm厚的洗净干燥的石英砂层,然后加入溶剂到柱体积的1/4,;用一定量的溶剂和吸附剂在烧杯内调成糊状,打开柱下端的活塞,让溶剂一滴一滴地滴入锥形瓶中,把糊状物快速倒入柱中,打开柱下端的活塞,在不断敲打柱身的情况下,填加固体吸附剂。柱填好后,上面再覆盖1cm厚的砂层。注意自始自终不要使柱内的液面降到吸附剂 高度以下,这样将会出现气泡或裂缝。柱顶部1/4处一般不充填吸附剂,以便使吸附剂上面始终保持一液层。 (2)展开及洗脱 当溶剂下降到吸附剂表面时,立即开始使用色谱柱。把试样溶解在最少量体积的溶剂中,该溶剂一般是展开色谱的第一个洗脱剂。 用滴管把试样溶液转移到色谱柱中,并用少量溶剂分几次洗涤柱壁上所沾试液,直至无色。不断加入展开剂,由于不同极性的组分在柱中移动的快慢不同,因而混合物中的各个组分在柱上分成不同的色谱带(指有颜色的组分)。使用不同的洗脱剂将色带一一洗脱下来,若洗脱速度较慢,若洗脱速度较慢,可以用水泵稍稍减压。 1. 装柱要紧密,要求无断层、无缝隙,无气泡。 2. 在装柱、洗脱过程中,始终保持有溶剂覆盖吸附剂。一个色带与另一色带的洗脱液的接受不要交叉。 注意事项

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