人食管下括约肌奋性和抑制性运动神经元特征.pdfVIP

主查塑墨 一 人食管下括约肌兴奋性和抑制性运动神经元特征 摘 要 目的：食管下括约肌(Lower sphincter， esophageal LES)主要受肠肌神经元支配，本研究探讨了支配入食毹’ fibres))∈ 下括约肌钩状纤维(claspfibres)矛D套索纤维(sling 奋性和抑制性肠肌运动神经元的形态和分布特征。 方法：l标本制备：选取河北医科大学第四医院2006 年3月到11月因高位食管中段癌行食管大部切除术忠并 20例，其中男10例，女10例，平均年龄53岁。将采集 新鲜食管胃结合部(Esophagogastric 标本，以下列两种方式切开，一种沿大弯侧切开以保留宠 整钩状纤维，另一种沿小弯侧切开以保留完整套索纤维。 rt-I， 将标本粘膜面向上固定到附有Sylgardl84胶培养ⅡlL 混合气体。将整个标本粘膜层及部分粘膜下层解剖掉，并 在解剖显微镜下把钩状纤维或套索纤维上的粘膜卜．层全 部仔细去掉。 7． 2荧光标记：将1个覆有荧光染料羰花青DiI(1，1 7，3 3,3，3 didodecyl 7一indocarbocyanine 0分 径200肛m玻璃珠放在钩状纤维或套索纤维上，轻压1 钟后，使玻璃珠粘附在肌纤维上，添加培养基DEM／F12 250ml到盛有标本的培养皿中，然后在37℃孵育箱孵育5 天，每日更换一次培养液，使荧光性物质Dil被支配食管 中文摘要 下括约肌肌纤维的肠肌运动神经元轴突末梢撖驭，”』∥ 性转运到神经元胞体。5天后，把培养后的标屈，艘入4。L 沈。 3免疫组化：用显微镊将肌间神经丛上的叫i行肌个琢 撕去，制成肌间丛贴附在纵行肌上的整装标本。放入90 ％甘油碳酸氢盐缓冲液浸洗3天。将含10％的』卜常、F．西二衍 鼠抗胆碱乙酰转移酶(Choline oxide 或兔抗一氧化氮合酶(Nitric j稀释 synthase，NOS 抗滴加到整装标本上，在室温下于湿盒中9晖fi4久：川 PBS液反复冲洗后，将FITC标记的羊抗鼠或’f：抗兔t江 加入标本中，于室温下在湿盒中孵育2天。冉JHPBS液 反复冲洗后，将标本装入90％甘油碳酸氢盐缓冲液tf，，在 落射荧光显微镜下观察记录被标记神经元胞体位黄及免 疫活性，拍摄标记清晰的神经元，并分析其形态。免疫… 性和免疫阴性神经元所占比例用mean士SEM表示，其支 配优势的显著性差异采用WilcoxonRanksTest Signed (SPSS12．O)。PO．05为有显著差异。 结果：l在DiI标记点上，可以看到一束被强标记的 平滑肌细胞，在其正下方，有直径约1mm荧光斑。 2当标本沿大弯侧剪开时，钩状纤维得以完整保存， 可以看到位于食管下段的半环形肌束。当附载Dil的玻 璃珠标记在该肌纤维上时，支配该肌的运动神经元被标 记。在lO例标本中，总共观察到292个神经元(每例标 本观察到15．45个标记神经元；平均29士3)。其中52％