南方地区家族性ungtington舞蹈病与it15基因突变相关性的研究.pdf

塑主兰篁堡兰 塑立丝垦室塞堡墅唑!壁!!堡堕堑皇!!!!兰堕銎壅塑茎堡塑竺塑 ITl5基因突变相关性的研究 中山大学附属第一医院神经科 研究生：邢世会 导师：黎锦如教授 中文摘要 Hungtington舞蹈病(HD)是一种常染色体显性遗传性神经系统变性疾病， ～般在40～50岁以后发病，但4岁到80岁之间的任何年龄均可发病．多于发病 15～20年后死亡。HD临床上主要表现为运动异常、智能减退及精神障碍，最终 可导致痴呆。HD的发病率与种族有关，欧洲和北美洲人群的发病率在5～10／10力-， 亚洲人群发病率相对较低。病理学改变主要表现为选择性的纹状体变性，这种改 个外显子构成，其中第1外显子内不稳定的CAG串联重复序列的异常扩展是HD 的基因突变特点。研究表明，正常人等位基因CAG重复次数多在26次以下， 呈现不完全外显，CAG重复次数在27～35次之间的个体临床上表现正常，但代 白在中枢神经系统和外周组织均有广泛表达，但是可导致典型的神经系统变性改 变。HD的发病机理非常复杂．目前研究表明，HD患者神经系统变性改变是由 兰巳兰垡篓茎．一 壹查些坚窒鳖壁坚!坐i!璺!!堡塑塑!坚!!茎堕窒壅塑差堡塑堕壅 于异常扩展的CAG序列导致huntingtin蛋白突变，获得毒性功能而对神经细胞 产生损伤。研究表明，ITl5基因突变有种族和地域差异性。本实验首次对我国 南方地区家族性HD基因(ITl5基因)进行研究。 目 的 本实验对我国南方地区家族性HD基因(ITl5基因)研究的主要目的；(1) 为HD患者的诊断；(3)比较HD患者和正常人CAG重复数目范围的差异；(4) 探讨CAG重复次数与发病年龄、疾病严重程度及性别的关系。 方法 HD患者来自于我国南方地区4个HD家系的77例成员，其中HD患者13 例，家系正常者64例。20例正常对照者来自该地区健康人群。HD的临床诊断 主要依据病史、家族史和临床表现。基因组DNA均从外周血白细胞中提取，PCR 方法扩增ITl5基因CAG重复序列。采用2％琼脂糖凝胶电泳和8％变性聚丙烯 酰胺凝胶电泳判断PCR扩增产物的大小。PCR产物经纯化回收后克隆并测序， 以明确目的基因的序列和重复次数。扩增产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后，根 片段大小)计算其它扩增产物的分子量大小，然后根据公式N(CAG)=(D州A 长度．侧翼序列长度)／3计算CAG重复次数N。所有数据的处理均在统计软件包 SPSSll．0上完成，并采用相应的统计学方法进行数据分析。 结果 1．四家系13例患者中有12例患者的首发症状为运动功能异常，占92．4％；1 例患者以精神异常为首发症状，占7．6％。 2．所有成员共被检测出13条不同的等位基因。13名患者均为杂合子，各被检 测出1条异常等位基因(三核苷酸CAG重复次数40)和1条正常等位基因 (三核苷酸CAG重复次数26)；6名HD患者亲属，各被检测出携带有1条 异常等位基因(三核苷酸CAG重复次数40)和l条正常等位基因{其他 HD患者亲属及对照者等位基因CAG重复次数均在17～26之间。正常者CAG 性差异(p0．05) II 硕上学位论文 南方地区家族性Hunclng【0n舞蹈病与ITl5基网突变相关性的研究 3．13例HD患者的平均发病年龄为48．4±8．2岁，发病年龄与CAG重复次数存 常等位基因分布频率最高(30．77％)，相应患者的发病年龄存在较大的差异。 3l岁～49岁不等。 4．病程相近的患者CAG重复次数影响疾病严重程度，即CAG重复次数越大， 病情有加重的倾向： 5．男性患者CAG重复次数为45±2．1次，女性患者CAG重复次数为47±4．2， 二者之间无显著性差异(p=O．26)：所有患者中9例为父系遗传，CAG重复 重复次数与遗传方式无明显相关性(p=O．38)。 结论 1．本研究对南方地区4个家系的13例HD患者和64例亲属及20例正常健康对 照者作17I15基因动态突变检测，所有患者均检测出携带异常等位基因，表明 我国南方地区家族性Hunt