宫颈癌hela胞裸鼠移植瘤模型的建立及大蒜素对移植瘤的影响.pdfVIP

中文 摘 要 人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤模型的建立及大蒜素 对裸鼠移植瘤的影响 摘 要 目的:宫颈癌是危害妇女健康的常见恶性肿瘤，死亡率为 妇科恶性肿瘤之首，现已经证实人乳头瘤病毒 (Human papillomavirus,HPV)是宫颈癌的重要致病因素。但由于HPV 病毒未能在体外常规培养，故关于宫颈癌的预防性研究相对 滞后。目前，裸鼠移植瘤模型已成为研究恶性肿瘤的生物学 特征和筛选抗癌药物的主要工具。本实验通过建立Hela细胞 裸鼠移植瘤模型，探讨大蒜素对Hela细胞裸鼠移植瘤生长以 及HPV18-E6的影响。 方法: 1 细胞培养 常规方法复苏Hela细胞，接种于含 10%胎牛血清的 RPMI-1640培养液的瓶中进行培养。 2 人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤模型的建立 将对数生长期的人宫颈癌Hela细胞接种于Balb/cnu/nu 裸鼠右大腿背侧皮下，建立裸鼠移植瘤模型。隔日观察裸鼠 移植瘤生长情况以及裸鼠的一般情况。 3 人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤的实验性治疗 接种Hela细胞2周后将裸鼠随机分成四组，每组五只，分 别尾静脉注射1.5ml，第1组注射生理盐水，第2,3,4组注 射大蒜素，剂量分别为lOmg/kg体重、25mg/kg体重、40mg/kg 体重，隔日注射一次，共注射7次。末次注射治疗后7天，拉 中文 摘 要 颈处死裸鼠，取瘤体称重，计算肿瘤生长抑制率。 4 血生化检查 取裸鼠血清检查尿素氮、血肌Pff、血蛋白、谷草转胺酶、 谷丙转胺酶等，观察大蒜素对裸鼠肝、肾功能的影响。 5 光学显微镜观察瘤体、肝、肾的病理变化 新鲜瘤体组织、裸鼠肝、肾组织制备光镜切片，HE染色， 观察用药后移植瘤、裸鼠肝、’肾组织的病理变化。 6 电镜观察凋亡细胞超微结构 取新鲜瘤体组织 1mmxlmmxlmm按常规方法制备超 薄切片，柠檬酸铅染色液染色，透射电镜观察拍照。 7 TUNEL法检测细胞凋亡 采用北京中山生物技术公司提供的TUNEL试剂盒。细 胞核中有棕黄色或棕褐色颗粒为凋亡细胞。计算各组的凋亡 指数 (AD. 8 应用半定量PCR方法检测HPV18-E6基因的表达 用纯化树脂ultrapure丁M提取基因组DNA。配制1%的琼 脂糖凝胶进行DNA完整性以及纯度的鉴定。应用相应的引物 进行PCR反应扩增基因组中的HPV18-E6以及p-actin。扩增 产物进行琼脂糖凝胶电泳。以HPV18-E6的IOD值/p-actin 的IOD值表示HPV18-E6的基因水平。 结果: 1接种细胞第3天，裸鼠开始活动减少，对外界刺激出 现不同程度的反应迟钝、消瘦，肿瘤移植成功率 75%。第5 天肿瘤移植成瘤率为100%。肿瘤的形态学以及HPV18-E6表 达均保持了细胞株的特性。 2 静肤汁射大森素后裸鼠一1o情况奸转，以高浓冷为 2 中 文 摘 要 著。对照组、低、中、高浓度组平均瘤重分别为 959.20士 55.71mg、634.92士64.29mg、441.98士45.56mg、167.00士 28.63mg。与对照组相比，各组的抑瘤率分别为 33.32%, 53.58%,82.46%，有统计学意义 (见Table1). 3 血清生化检测 注射大蒜素后裸鼠的血生化指标以及肝、肾组织与对照 组相比无显著变化 (见Tabe12,Tabel3)。大蒜素不影响裸鼠 的肝’R功能。 4 光镜下瘤组织形态学改变 与对照组相比大蒜素用药组移植瘤细胞体积缩小，有较 多细胞核染色质致密固缩，呈现凋亡改变，核分裂相较少(见 Fig.7)o 5 电镜下组织细胞形态学改变 与对照组相比大蒜素用药组细胞呈现细胞凋亡样改变， 随着药物浓度的增加，此种变化愈加明显