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应用肿瘤基因解工程数据库及rna干扰技术检测大肠癌基因表达谱
应用肿瘤基因解剖工程数据库及RNA干扰技术
检测大肠癌基因表达谱
中文摘要
第一部分应用肿瘤基因解剖工程数据库检测大肠癌基因表达谱
【目的】进一步了解大肠癌与正常组织间基因表达谱差异,寻找可能用于临床
诊断和治疗的目的基因。
【方法】应用美国肿瘤基因解剖工程(CGAP)数据库中基因表达序列分析
(SAGE)数据筛查大肠癌和正常组织差异表达基因,并用RT-PCR方法进一步
and
在大肠癌细胞株(SWIll6,Lovo,HCT8Hoe8693)及20例大肠癌及相应癌
旁组织标本中进行验证。
【结果】
常组织(NC一1,NC.2)SAGE数据进行对比分析,筛选大肠癌、正常组织差异
其中肿瘤组织基因表达高于『F常组织10倍以上差异基因33个,20倍以上差异
基因16个。相反,肿瘤组织基因表达低于正常组织10倍以上54个,20倍以
上差异者25个。
因表达不同,基因检测阳性率分别从35.3%到76.5%不等,可能与不同来源的大
肠癌细胞株生物学特性差异有关。在大肠组织标本中基因检0H,Uget性率达88.2%,
说明大肠组织SAGE检测与RT-PCR验证结果基本相符。
为7/20(35%),p0.01。
【结论】本研究结果提示利用CGAP数据库中SAGE数据能快捷、可靠地筛查
大肠癌差异基因表达谱,进一步分析这些基因的过度差异表达情况,可能为临床
提供诊断和治疗的相关基因指标。
第二部分RNA干扰介导TGFIBI沉默抑制大肠癌细胞生长
【目的】对于基因表达谱技术检测出来的大量差异基因,进一步鉴定其功能是
目前基因表达谱研究领域很少涉及的,在此我们用RNA干扰(RNAi)技术初步
研究本课题第一部分研究筛查的差异表达基因TGFl31对大肠癌细胞周期和细胞
生长的影响。
【方法】自行设计并用体外合成方法合成针对TGF
Jgl小片段干扰RNA(siRNA),
用脂质体转染大肠癌细胞株HCTl16,用流式细胞仪和软琼脂克隆实验观察siRNA
转染后大肠癌细胞的细胞周期、生长及成瘤性的变化。
【结果】(一)我们设计并用体外合成方法合成了TGF[H的2个小片段干扰RNA
59%一82.5%,进入G2期细胞减少。软琼脂克隆形成实验结果显示转染组细胞克隆
形成率较对照组显著下降,说明抑制TGF[31能降低肿瘤细胞生长及其成瘤性。
Bl表达抑制的显著差异性,但对HCTI16细胞的细胞周期影响及软琼脂克隆实
验方面还是有所差异,TGF[31—1片段似乎优于TGFIgl一2片段。但二者均可有效
抑制大肠癌细胞的侵袭性,并取消TGFl31的G1期阻滞效应。
【结论】本研究结果提示通过转染针对TGF[31的siRNA能有效抑制其在细胞中
的表达,影响细胞周期变化并降低大肠癌细胞生长及成瘤性,RNAi能够快速地
了解目的基因功能,可作为进一步研究基因表达谱差异基因的有效方法。
【总结】 综上所述,我们首先在国内应用CGAP数据库对大肠癌差异基因表
达谱进行了快速有效的检测及确证,RNAi技术可以有效分析差异基因TGFIBl
功能,抑制TGFl31使大肠癌细胞s期阻滞并减低肿瘤细胞生长及成瘤性。进一
发病机制的研究有一定价值。
关键词:大肠癌:基因表达谱;基因表达序列分析;TGFl31;RNA干扰
oftheProffiesofGene in Cancer
Analysis Colon
Expression by
CancerGenome andRNAInterference
Using Anatomy
Project
Abstract
I
Part Detectionofthe of incoloncanc
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