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口腔医学富血小板纤维的讨论口腔医学论文 20世纪末，随着基于生长因子的细胞治疗概念的提出［1］，血小板浓聚物的开发成为新的研究热点。富血小板血浆(platelet-richplasma，PRP)作为第一代的血小板浓聚物，自1998年首次提出以来［2］，广泛应用于促进软硬组织的愈合再生，涉及整形外科、运动医学、口腔颌面外科、牙周病学等多学科［3］。由于PRP在制备过程中应用牛凝血酶和氯化钙对血液进行处理而存在潜在的免疫原性危险［4］，促使了更安全的第二代血小板浓聚物，即富血小板纤维(platelet-richfibrin，PRF)的产生，其最早由法国Choukroun等［5］提出。PRF制备简单，无需对血液进行处理，在临床上具有广阔的应用前景。本文就近年来PRF在口腔医学的研究进展作一综述。 1PRF的制备 由Choukroun［6］提出的PRF(Choukroun’sPRF)制备方法如下:抽取10ml静脉血，立即在400g离心力下离心10min;离心后血样分成三层:底层红细胞层，上层无细胞血浆，中间层即PRF。由于血液收集后很快会凝固，所以获得可用的PRF关键在于操作要迅速。临床上常用两层纱布轻柔挤出PRF中血清以获得操作性能良好的PRF纤维膜。另一种PRF由美国CascadMedical的FibrinetPRFM设备生产，这种富血小板纤维制备技术需两步离心、类似于PRP的制备技术。制备时虽不加牛凝血酶，但仍需加入柠檬酸钠抗凝剂、分离白细胞的凝胶和氯化钙，相较Choukroun’sPRF制备昂贵且仍存在潜在的危险［7］。文献中PRF这一术语通常就是指Chouk-roun’sPRF，本文亦然。 2PRF的成分和结构 PRF为富含血小板和白细胞的纤维凝胶，其内含有多糖链和各种结构糖蛋白，如纤连蛋白、纤维原等。DohanEhrenfest等［8］测得血液中接近97%的血小板、大于50%的白细胞浓聚于PRF凝块中。PRF内血小板和白细胞活化后能释放出细胞因子，主要的血小板生长因子有转化生长因子(transfor-minggrowthfactorβ-1，TGFβ-1)、血小板衍生因子(platelet-derivedgrowthfactors，PDGFs)和类胰岛素生长因子(insulin-likegrowthfactors，IGFs)［9］;白细胞分泌的调节因子主要有白细胞介素(interleukin，IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor，TNF)-α等促炎因子和抗炎因子IL-4以及血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)［10］。DohanEhrenfest等［11］研究表明，PRF膜在7d内缓慢释放约273．4ngTGFβ-1和50．3ngPDGF-AB;第一天释放的量约为7d总量的40%，之后速度减慢，最后两天释放约占总量10%。而Su等［12］研究发现PRF制备5h后释出液中的PDGF-AB、TGFβ-1、表皮生长因子(epidermalgrowthfactor，EGF)和VEGF总量能分别达到52．73ng、72．21ng、3．23ng和1．04ng，且前三种生长因子分别占血小板总容量的17%、55%和82%，而IGFs则保持在249．16ng。这与He等［13］研究结果基本一致，其证实PRF中TGFβ-1和PDGF-AB在7d内释放的总量分别超过150ng和50ng，并且在28d后仍然能以ng水平大量释放。尽管这些研究在具体数值上存在差异，可能与制备时所得的PRF量和检测方法不同有关，但均证实PRF能长时间的释放大量的生长因子，提示PRF应用于临床时能使这些生长因子的作用更长久，而丰富的生长因子能加速组织的愈合和再生。组织学分析PRF凝块表现为三个区域，即红血栓区、无细胞纤维区和两者之间富含血小板的血沉棕黄层，血小板主要集聚在红血栓侧，提示PRF凝块近红血栓的一侧更具临床应用价值;而多糖链则分布于纤维区，且随纤维的网格状结构走行，对小循环分子有高亲和力，提示PRF具有支持细胞迁移和组织愈合的功能［9］。对PRF制备后析出的上清及释出液进行生化分析，发现其中TGFβ-1、PDGFs、IG-Fs、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4和VEGF的含量极低，说明这些生长因子主要存在于PRF中;而同样进行凝胶电泳也显示纤维蛋白原、纤维连接蛋白等参与纤维网架形成的蛋白缺失，提示多种多糖链、结构性糖蛋白是完全捕获在PRF膜中的，说明PRF膜中含有丰富的纤维［9－10，12］。纤维在组织愈合过程中有重要的作用，损伤区周边上皮细胞最终迁移至纤维基质，加速损伤软组织的覆盖;而在神经血管化作用下，纤维能捕