基因治疗载体研究现状及前景药理学论文.docVIP

基因治疗载体研究现状及前景药理学论文 基因载体主要有病毒载体和非病毒载体。病毒载体的基因转运能力强,但其携带基因的大小数量有限,而且在临床应用上存在安全性问题(王海等. 2006)。非病毒载体具有低毒、低免疫反应,外源基因随机整合率低且携带基因大小类型受限制等优点,已成为基因治疗中的热点和当前药剂学研究的前沿课题。随着人类基因组计划的完成和后基因组计划的实施,功能基因不断涌现。如何将所需的功能基因导入受体细胞是基因研究中的关键步骤,因此开发安全有效的基因传递载体成为了当前研究的重要工作之一。对于非病毒载体,其基因传递方法又可分为物理法( carrier-free gene deliver-y )和化学法( synthetic gene delivery)。因此,无论是基因载体还是传递方法的发展都将对基因治疗产生深远的影响。《Journal ofGeneMedicine》对2008年在临床基因治疗中所用载体的类型和各期基因临床试验的情况进行了调查。该调查发现在载体材料的使用中,腺病毒载体占24·9% (367例) ,为各种载体之首,但进入III期临床试验的基因治疗占3·2%(47例)。也就是说在基因治疗的临床应用上,研究者变得更谨慎和小心,就目前基因治疗的状况而言,安全性,即致畸、致癌和致突变,靶向特异性及体内转染效率等问题,已成为基因治疗所遇到的瓶颈问题。因此,如何研制出安全有效的、生物相容性好的基因药物载体,如何提高非病毒性基因载体的靶向特异性和体内外转染效率,已经是迫在眉睫的关键问题。 1　基因载体的种类 基因治疗载体可分两大类:病毒性载体和非病毒性载体。 2　病毒性载体 病毒性载体如逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、痘苗病毒、疱疹病毒等。逆转录病毒应用最早,研究也相当深入,目前仍被广泛应用。虽其经改造后去除了病原性,保留了高的基因转染效率,但因制备困难、目的基因容量小、靶向特异性差,以及自身免疫原性和生物安全性问题,限制了它们的应用。特别是1999年出现首例因使用腺病毒载体而致病人死亡的事件发生后美国许多科研机构已停止使用病毒类载体,重点转向非病毒类载体研究。 3　非病毒载体的研究进展 理想的非病毒载体需要满足以下条件: (1)保护DNA不被细胞外DNA降解酶的降解; (2)携带DNA穿透细胞膜; (3)保护DNA在进入核前不被细胞内容酶体和酶等降解; (4)能有效将有活性的基因插入目的区; (5)可生物降解,从细胞中消除; (6)无细胞毒性[1]。目前非病毒基因载体的研究主要集中于以下几个方面: 3.1　阳离子多聚物载体　阳离子多聚物/DNA混合物称为polyplex。阳离子多聚物(polycation)可浓缩富含阴离子的DNA,然后粘附到细胞表面的硫酸粘多糖上,被细胞内吞进入细胞内,从而使质粒表达。报道的阳离子多聚物种类很多,如聚乙烯亚胺(polyethylenimine, PEI),聚丙烯亚胺树突状物(polypropylenimine dendrimers),聚酰胺树突状物( poly-amidoamine dendrimer ),多聚赖氨酸、多聚组氨酸、多聚精氨酸、鱼精蛋白、壳聚糖(chitosan)等以及上述聚合物的聚乙二醇修饰物。其中研究较早的是多聚赖氨酸,后来发现聚乙烯亚胺性能更佳,是目前研究的热点。PEI可抑制溶酶体,在吞噬泡酸性环境中质子化、正电荷增加,对DNA提供更大的保护作用,有利于质粒逃离吞噬泡[2]。PEI糖基化或聚乙二醇化增加了其生物兼容性,阳离子多聚物/DNA混合物经PEG修饰后,可形成囊泡状结构,屏蔽表面多余的正电荷,有利于体内应用。 3.2　纳米颗粒载体　纳米颗粒载体介导基因转染具有其他非病毒载体所没有的优势。首先,纳米颗粒在一定范围内的颗粒数目对细胞的生长及活性无明显影响,细胞毒性和遗传毒性较其他载体低很多;同时纳米载体不存在免疫原性,因而不会导致免疫反应的发生。其次,纳米颗粒传递基因的效率较高。很多纳米材料作为载体传递基因的效率与脂质体相当甚至高于脂质体。第三,由于自身体积小,纳米颗粒可以在血管中随血液循环,并可通过血脑屏障到达身体各组织中。最后,纳米颗粒在体内的循环时间明显长于普通大小的颗粒,在短时间内不会很快被吞噬细胞清除,从而可以延长与细胞的接触时间,提高转染效率。同时,纳米颗粒还可与DNA形成致密结构,使DNA不被核酸酶消化降解,有浓缩保护DNA的作用。目前研究较多的纳米粒主要有无机纳米粒(如磷酸钙、磁性氧化铁)、固体脂质纳米粒、可降解聚合物纳米粒(如PLA、PLGA)、天然高分子纳米粒(如壳聚糖及其衍生物)、有机硅纳米粒等。 3.3　脂质体　脂质体DNA复合物又称为lipoplexes。应用的转