第六章分子杂交技术解析.pptVIP

第六章 分子杂交技术 第一节 探针的选择和标记 第二节 杂交和洗膜 第三节 检测与分析 1、原理 碱基互补配对 探针（probe） 同特异性目标作用 有效检测 2、基本步骤 探针的选择和标记 转膜 预杂交、杂交 洗膜 检测 第一节 探针的选择和标记 1、克隆探针和合成的寡核苷酸探针 特异性 灵敏度 杂交时间 2、寡核苷酸探针的类型和应用 特定序列的单一寡核苷酸探针 较短而简并性较高的成套的寡核苷酸探针 对少量高度纯化的蛋白质进行测序；按照遗传密码推导 较长而简并性较低的寡核苷酸探针 ①只含有所有可能密码中的一部分 ②简并位点上带上一个“中性”碱基，如次黄苷酸 例：根据氨基酸序列选择长17个核苷酸的寡核苷 酸探针 数目 2×2 ×2×4=32 3、寡核苷酸探针的选择原则 长度18-50bp G、C碱基组成在40%-60% 分子内不存在互补区 避免在序列中连续出现一个碱基的多次重复 4、探针的标记方法 双链DNA探针的制备 切口平移；随机引物（光盘） 使用前变性；杂交过程中可能发生自退火 单链DNA探针的制备 在单链模板上进行引物延伸反应；化学合成；PCR 单链RNA探针的制备 双链DNA的切口平移标记法 DNA的