2 紫外可见吸光光度法及分子.pptVIP

2.1.4 吸光度的加和性与吸光度的测量 A = A1 + A2 + … +An 用参比溶液调T=100%（A=0），再测样品溶液的吸光度，即消除了吸收池对光的吸收、反射，溶剂、试剂对光的吸收等。 2.2 光度分析的方法和仪器 方便、灵敏，准确度差. 常用于限界分析. 2.2.1 光度分析的几种方法 1.目视比色法 观察方向 空白 c1 c2 c3 c4 2. 光电比色法 光电比色计结构示意图 通过滤光片得一窄范围的光(几十nm) 滤光片 吸收滤光片：只允许指定的窄范围波长光通过，其他波长的光均被吸收. 选择滤光片的原则： 滤光片透光率最大的光是溶液吸收最大的光, 即滤光片的颜色与有色溶液的颜色互补. 3. 吸光光度法和分光光度计 光源 单色器 吸收池 检测系统 分光光度计的基本组成 通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光. 波长可调, 故选择性好, 准确度高. 分光光度计的主要部件 光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够 的光强度,稳定。 可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500nm) 紫外区：氢灯，氘灯(180～375nm) 氙灯：紫外、可见光区均可用作光源 ?/nm 钨灯（热辐射光源） 400 600 800 1000 氙灯（气体放电光源） 氢灯 强度 氙灯 氢灯 钨灯 单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。 棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同. 玻璃350～3200nm, 石英185～4000 nm 入射狭缝 准直透镜 棱镜 聚焦透镜 出射狭缝 白光 红 紫 λ1 λ2 800 600 500 400 光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。 利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光。 波长范围宽, 色散均匀, 分辨性能好, 使用方便. －平面透射光栅 －反射光栅（广泛使用） 光栅衍射示意图 M1 M2 出射狭缝 光屏 透镜 平面透射光栅 吸收池(比色皿)：用于盛待测及参比溶液。 可见光区：光学玻璃池 紫外区：石英池 检流计（指示器）： 低档仪器：刻度显示 中高档仪器：数字显示，自动扫描记录 检测器：利用光电效应，将光能转换成 电流讯号。 光电池，光电管，光电倍增管 硒光电池（Barrier-layer photocell） 适用于300-800 nm, 在500-600 nm范围最灵敏。 Se 阴极Au，Ag 半导体 h? 阳极 光电管(Phototube) h? （片） 红敏管 625-1000 nm 蓝敏管 200-625 nm 光电倍增管(Photomultiplier Tube, PMT) 1个光子可产生106～107个电子 160-700 nm 722型分光光度计 光源：钨卤素灯－12V、30W 波长范围：330～800nm 分光元件：光栅，1200线/mm 检测器：端窗式G1030光电管 多碱阴极真空管 300～850nm 波长精度：2nm 光谱带宽：6nm 波长精度：仪器波长指示器所显示的波长值与仪器 对应输出的实际波长值之间的符合程 度。可用二者之差来衡量。 吸光光度法仪器主要差异比较 可见光 （380～780nm） 紫外光 （200～380nm) 中红外 （2.5～ 50 ?m ) 光源 钨灯 碘钨灯 320～2500 氢灯 氘灯 180～375 硅碳棒 （红外线） 吸收池 材料 玻璃 （350～3200） 石英 （185～4000） NaCl晶体 1. 单光束分光光度计 可变波长单光束紫外-可见分光光度计示意图 2.2.2 分光光度计的基本类型 2. 双光束分光光度计 参比池 检测器 滤光片或 单色器 放大器 样品池 光源 hv 光子检测器 反光镜 反光镜 透明部分 扇形镜 正面图 扇形镜 反光镜 栅镜 双光束型可以消除光源强度变化的影响. 多通道仪器（Multichannel Instruments） 光电二极管阵列(通常具有316个硅二极管) photodiode arrays (PDAs) 同时测量200～820nm范围内的整个光谱, 比单个检测器快316倍,信噪比增加3161/2 倍. 3. 其他类型分光光度计 纤维光度计 将光度计放入样品中, 原位测量. 对环境和过程监测非常重要. HP 8452A多通道二极管阵列分光光度计 镀铝反射镜 纤维光度计示意图 纤维光度计 * 二战期间，美国政府希望士兵得到较好的营养。但是当时，不知道食品中到底有什么维生素，有多少。在当时需要一个即便宜有快的方法。1941年，第一台co