动物细胞工程课件讲解.pptVIP

2.2 动物细胞工程 1、大规模的生产生物制品。 2、培养的动物细胞作为基因工程的受体细胞。 3、检测判断物质的毒性。 4、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于 等，为 及其他疾病提供理论依据。 * * 2.2 动物细胞工程 生产单克隆抗体 常用技术手段 动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 动物细胞工程常用的技术手段技术： 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 一、动物细胞培养 1 、动物细胞培养的概念 动物细胞培养技术 动物组织块 细胞悬液 原代培养 传代培养 胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞 幼龄动物的器官组织；动物胚胎 动物细胞培养过程 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 加入培养液 用胰蛋白酶等处理贴壁细胞 适宜条件 不死性细胞 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 3.如何界定原代培养和传代培养？ 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 ⑴原代培养: 将动物组织消化后的初次培养。 ⑵传代培养: 对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续培养。 无菌无毒环境、充足营养（血清或血浆）、适宜温度、PH、气体环境。 4、体外培养动物细胞需要物质和环境条件 ⑴无菌、无毒的环境 ①对培养液、培养用具进行无菌处理； ②在培养液中加抗生素； ③定期更换培养液。 ⑵充足的营养 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、 微量元素、血浆或血清 为什么要加血清呢？ ⑶温度和PH 36.5±0.5℃ ；PH = 7.2―7.4 ⑷气体环境——O2和CO2 C02的主要作用是维持培养液的PH。 含95%的空气 5%CO2 5.动物细胞培养应用： 筛选抗癌药物 治疗和预防癌症 二.动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）。 分 类 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易； 细胞分化程度高，恢复全能性不容易 1.动物细胞核移植概念： （难度高） 2、体细胞核移植的过程： 请看教材P48图2-21 思考： 1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？用此细胞作为受体细胞有什么好处？ MⅡ中期卵母细胞 卵母细胞体积大，便于操作；含有营养物质丰富，提供早期胚胎发育所需的营养；含有激活细胞核体现全能性的物质。 电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎 卵母细胞采集、培养 MⅡ期卵母细胞 供体牛 供体细胞注入去核卵母细胞 代孕母牛 克隆牛 体细胞培养 去核卵母细胞 去核 胚胎 移植 体细胞核移植过程（体细胞克隆动物） １、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。 ２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？ 10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，未发生突变 思考题 3、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞 思考题 1996年，英国人Ian Wilmut成功获得体细胞克隆羊“多利”，这是世界上第一例利用成年体细胞核获得的克隆动物. 3.体细胞核移植技术的应用前景： 1.加速家畜遗传改良的进程 2.保护濒危物种 3. 生产医用蛋白质及克隆动物组织、器官 4.了解胚胎发育和衰老过程； 5.追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病 4、体细胞核移植技术存在的问题 P50 （1）成功率非常低 （2）克隆动物以表现早衰、生理缺陷等健康问题 思考与探究 1.幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养？思考一下，这是什么道理？ 细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。 所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。 同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养。 思考与探究 2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？ 动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化的动物