第三节细胞周期的调控(CellCycleControl)分析.pptVIP

第三节 细胞周期的调控(Cell-Cycle Control) - MPF的发现及其作用 - p34cdc2激酶的发现及其与MPF的关系 - 周期蛋白 - 细胞周期检验点(Cell CycleCheckpoint) 细胞周期调控系统的主要作用 - 在适当时候激活细胞周期各个时相的相关酶 和蛋白 - 确保每一时相事件的全部完成 - 对外界环境因子起反应(如多细胞生物对增殖 信号的反应) 细胞周期检验点(checkpoint) 细胞周期检验点是细胞周期调控的一种机制,主要是确保周期每一时相事件的有序、全部完成并与外界环境因素相联系 细胞周期检验点及其作用 G1期检验点： 芽殖酵母—Start； 动物细胞—Restriction Point 哺乳动物细胞周期的控制 哺乳动物细胞周期的限制点（restriction point） 哺乳动物细胞体外培养时，需要添加多肽生长因子促进细胞的分裂； 如果缺少生长因子, 就会被阻止在G0阶段, 一旦在培养基中添加了生长因子, 这些细胞在14～16小时后通过细胞周期限制点； 细胞一旦通过了G1期的某一点（限制点）, 这些细胞就能够进入S期并完成其后的细胞周期过程； - 由此推测, 哺乳动物细胞周期的限制点相当于酵母的START点。 一 MPF的发现及其作用(Maturation-promoting factor，Mitosis-promoting factor, M Phase-promoting factor ) MPF是一种使多种底物蛋白磷酸化的蛋白激酶； 由M期Cyclin-Cdk(Cyclin-dependent protein kinase)形成的复合物。MPF=CDK1=p34cdc2+cyclinB 1970年, Johnson 和Rao将Hela 细胞同步化在细胞周期中的不同时期, 然后将M期 细胞与其他间期细胞(如袋鼠细胞PtK)融合, 发现与M期融合的间期细胞发生了形态各异的染色体凝集, 称为染色体超前凝集(premature chromosome condensation). 人M期细胞与袋鼠（Ptk）G1、S、G2期细胞融合诱导PCC：提示M期细胞存在诱导PCC的因子(细胞促分裂因子)； M期细胞中可能存在一种诱导染色体凝集的因子, 称为细胞促分裂因子(M phase-prometing factor). 1971年, Masui和Markert明确提出MPF. MPF 成熟促进因子(maturation promoting factor，MPF）,早期称为M-期促进因子(M-phase promoting factor, MPF)，是指M期细胞中存在的促进细胞分裂的因子 1988年, Maller 实验室以非洲爪蟾卵为原料, 分离获得了纯化的MPF, 并证明其主要含有 p32 和p45两种蛋白. 具有蛋白激酶活性. MPF的结构组成 - 是由两个不同的亚基组成的异质二聚体 - 催化亚基 是丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶 其活性有赖于周期蛋白，故蛋白称为周期依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent protein kinases,Cdks); - 调节亚基：周期蛋白(cyclin)。 Genetic studies of S.pombe (裂殖酵母) 酵母的细胞周期基因突变 - 温度敏感突变型, 可分成两类 cdc突变 这类突变在非允许的温度下培养, 形成特别长的细胞; wee突变 这种突变长得特别小而不能分裂。 裂殖酵母的MPF - 对突变体的研究发现,没有Cdc2的活性,细胞不能进入有丝分裂 序列分析表明该基因编码一个相对分子质量为34kDa的蛋白, 该蛋白又称为p34cdc2 蛋白； 研究发现酵母Cdc2蛋白是一种蛋白激酶, 调节G2/M的转换 芽殖酵母的Cdc28蛋白 Studies showed that S. cerevisiae cdc28 and S. pombe cdc2 are functionally homologous genes 在G2/M期转换中起重要作用 分子量也是34KD, 称p34cdc28 P34cdc28也是一种蛋白激酶 - 本身无激酶活性, 必须与有关蛋白结合后才有激酶活性 三 周期蛋白(cyclin) - 在细胞周期中呈周期性变化。 - 含有一段约100个氨基酸的保守序列，称