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PPT模板下载：/moban/ 遗传病的基因诊断 ——以血红蛋白为例 Point A 遗传病的基因诊断 Point B 目录 单击此处添加内容 单击此处添加内容 标题 标题 标题 标题 单击此处添加内容 单击此处添加内容 单击此处添加内容 单击此处添加内容 单击此处添加内容 单击此处添加内容 01 PCR检测缺失 PCR/RDB法 扩增不应变 系统（ARMS） 基因突变位置已知的检测 02 基因突变位置未知的检测 PCR-单链构象多态性（SSCP） PCR技术应用于基因检测 PCR检测缺失 如果某一基因位点存在缺失而且基因结构是已知的,那么用PCR扩增该基因的一个或数个片段(多重PCR)是检测其缺失最快速可行的方法。 如：DMD，AZF的检测。 DMD：假肥大性肌营养不良 X-连锁隐性遗传 PCR/RDB法 设计方法： 设计合成两组寡核苷酸探针： 一组相应于突变基因碱基序列的寡核苷酸探针， 另一组相应于正常等位基因碱 基序列的寡核苷酸探针。 将这两组探针固定在尼龙膜条上，用此膜条与经PCR扩增的靶序列DNA杂交。 01 若受检者DNA能与突变基因碱基序列的寡核苷酸探针杂交而不与其相应的正常序列的寡核苷酸探针杂交,则说明受检者为这种突变的纯合子 02 若受检者DNA同时能与此两种寡核苷酸探针杂交,则说明受检者为这种突变基因的杂合子 03 若受检者DNA不能与突变基因碱基序列的寡核苷酸探针杂交而与其相应的正常序列的寡核苷酸探针杂交,则说明受检者不存在这种突变。 结果分析 扩增不应变系统（ARMS） 原理： 在DNA序列一端的可能点突变处设计两个引物，突变位点位于引物的3’末端： 一个相应于正常等位基因序列引物 一个相应于突变基因等位序列引物 再在DNA另一端设计一个共同引物，从而用PCR对突变基因进行检测,因此也叫等位基因特异性PCR。 目前已成功应用该法对B-地中海贫血进行基因诊断。 扩增不应变系统（ARMS） 基本原理: PCR产物经变性后产生两条不同的单链，各单链根据自己的一级结构而形成不同的构象。 PCR-单链构象多态性（SSCP） 结果分析： 如果某一片段发生突变，那么其单链的空间结构将随之发生变化，经非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳后不同构象的片段因其具有不同的迁移率，而在凝胶上显示出不同的带型，从而确定野生型和突变型基因。 PCR-单链构象多态性（SSCP） 所有的基因突变最后都需要通过测序来确定其突变类型及突变性质。 对于基因较小特别是外显子少的突变分析可以通过直接测序来进行。 而对于较大的基因,由于费用昂贵,不适宜于对临床大量标本的检测。 DNA直接测序 DNA芯片(又称基因芯片或微阵列)分为 寡核苷酸芯片 cDNA芯片。 DNA芯片技术基础是核酸分子杂交。 DNA芯片 * * SSCP法是目前检测疾病基因最常用的方法,对于小于200 bp的DNA片段,检出率达90%以上。其缺点是能进行有效分析的片段较短,检出率随PCR产物长度的增加而降低。该法是目前检测各种遗传病未知的基因突变的常用方法。 * 目前,DNA芯片技术已经取得了长足的发展,得到世人的瞩目。已应用于BRCA1基因、CFTR基因、ATM基因、B-地中海贫血、酵母突变菌株间、HIV-1逆转录酶及蛋白酶等的突变检测。同时还应 用于人类基因组单核苷酸多态性的鉴定、作图和分型,人线粒体基因组多态性的研究;基因表达研究;定位克隆;基因组文库作图来确定邻近克隆的顺序(遗传作图);杂交测序等方面的研究。但是仍然存在着技术成本昂贵、复杂、检测灵敏度低、重复性差,分析范围较窄等问题。 * PPT模板下载：/moban/ * * SSCP法是目前检测疾病基因最常用的方法,对于小于200 bp的DNA片段,检出率达90%以上。其缺点是能进行有效分析的片段较短,检出率随PCR产物长度的增加而降低。该法是目前检测各种遗传病未知的基因突变的常用方法。 * 目前,DNA芯片技术已经取得了长足的发展,得到世人的瞩目。已应用于BRCA1基因、CFTR基因、ATM基因、B-地中海贫血、酵母突变菌株间、HIV-1逆转录酶及蛋白酶等的突变检测。同时还应 用于人类基因组单核苷酸多态性的鉴定、作图和分型,人线粒体基因组多态性的研究;基因表达研究;定位克隆;基因组文库作图来确定邻近克隆的顺序(遗传作图);杂交测序等方面的研究。但是仍然存在着技术成本昂贵、复杂、检测灵敏度低、重复性差,分析范围较窄等问题。 *