NS-398对肝癌细胞株和裸鼠移植瘤MMP-2、MMP-9影响的实验研究.pdfVIP

中文摘要 NS-398对人肝癌细胞株和裸鼠移植瘤 MMP．2、MMP一9影响的实验研究 摘 要 目的：原发性肝癌为我国常见恶性肿瘤之一，其中肝细 胞癌(hepatocellular 物学特征为易复发、转移、预后差、病死率高。手术切除目 前仍是肝癌的首选治疗，但手术后复发、转移率很高，是造 成临床治疗失败和病人死亡的主要原因。因此研究肝细胞癌 的发病机理以及探讨新的可行的治疗方案具有极其重要的 临床意义。 非甾体类抗炎药(nonsteroidalanti—inflammatorvdrugs， NsAms)是一类解热、镇痛、抗炎的药物，近年来人们发 现NsAIDs在抗肿瘤治疗方面有一定的疗效，其抗肿瘤的理 的抑制来实现的u。4J。cox是花生四烯酸合成PGE，的限速 酶，存在两种亚型：结构型COx．1和诱导型COX．2。COx．1 在多数正常细胞中呈稳定表达，负责前列腺素的合成而参与 生理过程；cox一2在细胞受到各种刺激因素(生长因子、炎 症介质、致癌剂等)的诱导下合成，参与炎症、疼痛、细胞 增殖、分化、凋亡及肿瘤发生等多种病理过程。目前对于 cOx一2促进肿瘤生长的机制所知甚少。新近研究表明， cox．2的表达与肿瘤侵袭转移及临床病期密切相关‘5。9】。在 matrixECM)、穿透基底膜(basement 中文摘要 关键性的一步，而基质金属蛋白酶(MMPs)系统在这一过 程中起着重要作用。不同的肿瘤细胞其表达的MMP亚型有 所不同，其中MMP一2与MMP．9与肿瘤侵袭转移的关系报 导最多¨“¨J。本研究通过应用cox一2特异性抑制剂NS．398 对肝细胞癌SMMC．7721细胞及其裸鼠移植瘤进行药物干 预，检测MMP一2和MMP一9的表达情况，进一步在分子水平 探讨NS．398在肝癌治疗中的化学预防作用。 方法：1．对人肝细胞癌sMMC．7721细胞进行常规培养。 mol／L Ns一398取O、25、50、75、100u5个浓度组，每个浓 度组选取24h、48h、72h三个作用时间点进行检测，采用 RT_PcR半定量和FcM定量检测对不同时间点、不同浓度 达的影响。 nu／nu裸小鼠的 2．取l×107／ml细胞悬液接种于BALB／c 右腋下皮下构建肝癌SMMC一7721细胞裸鼠移植瘤。2周后 可触及皮下瘤块。16只裸鼠随机分为实验组和对照组(每组 8只)。实验组给予3 mg／蛭NS．398腹腔注射，每周3次给药， 给药9周后处死。 3．测量两组移植瘤的长径、短径并称瘤重，采用免疫组 织化学方法检测cox一2特异性抻制剂NS．398对裸鼠移植瘤 MMP．2、MMP一9蛋白表达的影响。 结果：1．通过体外实验对肝细胞癌sMMC．7721细胞进 行药物干预，观察不同时间和不同剂量的NS一398对MMP一2、 MMP一9 mRNA和蛋白表达的影响。结果表明：NS一398可抑 制SMMC一7721细胞MMP一2、MMP一9mRNA和蛋白水平表 达，并且随剂量的增加和作用时间的延长而明显减少，呈显 中文摘要 著地时间和剂量依赖性(Jp0．05)。 2．体内实验中，通过对SMMc一7721细胞裸鼠移植瘤进 行药物干预，观察一定剂量的NS．398对移植瘤生长的影响。 结果表明：实验组肿瘤的体积及重量均明显小于对照组(JD 0．05)，随着用药时问的增加，Ns一398对肿瘤生长的抑制 作用增加，实验结束时，实验组肿瘤的体积为(0．21±0．14) g，重量抑瘤率为72．4％。 3．在检测NS一398对裸鼠移植瘤生长影响的同时，检测 理组和对照组移植瘤组织中MMP一2与MMP一9蛋白表达的灰 度值分别进行分析，结果表明：处理组和对照组中MMP一2 组和对照组中MMP。9蛋白表达的灰度值分别为25．55±5．37 移植瘤MMP一2、MMP一9蛋白的表达水平(P0．05)。 的表达，并呈显著的剂量和时间依赖性关系。表明C0x一2