宣木瓜中三萜酸的提取分享及体外抑菌特性的研究.pdf

摘 要 宣木瓜为药食两用果品，含有丰富的营养和多种生理活性物质，尤其是其所含的 齐墩果酸和熊果酸（五环三萜酸，皂甙类物质）,具有显著的药理作用和生物活性。 为了充分有效的利用宣木瓜资源，本研究对安徽宣城地区宣木瓜果实成分进行探讨， 研究了宣木瓜中五环三萜酸皂甙类物质的提取、分离和纯化工艺，并在此基础上运用 新型分离纯化技术，制得高纯度的齐墩果酸和熊果酸单体；另外，对齐墩果酸和熊果 酸皂甙混合物的体外抑菌作用进行了研究， 为宣木瓜的深加工及生理活性成分的综合 利用提供了理论依据。 本研究主要结果包括： 1.宣木瓜果实成分研究结果表明，宣木瓜中化学成分包括水份、、总糖、有机酸、 粗纤维、 蛋白质、 齐墩果酸、 熊果酸和果胶物质， 含量分别为 85.031%、 2.582%、 2.924%、 1.752%、1.264%、0.086%、0.040%、1.321%。 2.建立了分析型HPLC对宣木瓜中齐墩果酸和熊果酸同时定性定量分析的方法， 即：色谱条件为：色谱柱：Phenomenex C (250mm×4.6mm i.d.，5μm)；流动相：V(乙 18 腈)：V(纯净水) =95:5；柱温：25℃；流速：0.5mL/min；检测波长：210nm；进样量： 5μL。 3. 采用超声波辅助提取法提取宣木瓜中五环三萜酸皂甙，正交结果得出最佳工 艺组合为乙醇浓度 85%，提取温度 55℃，提取时间 20min，液料比 1：20。对提取物 进行多次纯化，分析型 HPLC 进行测定，结果表明：正丁醇水饱和溶液萃取所得五环 三萜酸纯度为 41.41%，经大孔吸附树脂层析法纯化后五环三萜酸纯度为 71.98%，在 此基础上，采用反相硅胶柱法进行纯化，得到样品纯度为 93.56%的三萜酸。另外， 经同时测定宣木瓜中齐墩果酸和熊果酸含量，计算得知二者比例为 2.14～2.22:1， RSD 值为 1.39%。 4. 利用制备型 HPLC 对反相硅胶柱法所得五环三萜皂甙混合物进行处理， 通过分 段收集的方法对皂甙混合物中的齐墩果酸和熊果酸进行分离，经分析型 HPLC 检测， 结果表明制备型 HPLC 分离皂甙混合物的方法可行，制备后分别得到 97.50%的齐墩果 酸和 97.27%熊果酸单体。建立的制备型 HPLC 最优色谱条件为：流动相：色谱柱为 pursuit XRs C (250 mm ×212 mm ,5μm)；甲醇：水=80∶20 （V:V）；体积流量： 18 20mL/min；检测波长：210nm ；柱温：25℃；进样量：2.0mL。 5.宣木瓜中五环三萜酸的体外抑菌结果表明，五环三萜酸具有广谱抗菌作用，对 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑制效果，其中对金黄色葡萄球菌的抑制效果最 好；不同纯度的五环三萜酸对枯草芽孢杆菌均有抑制作用，且纯度越高抑菌效果越明 显；经实验测定，反相硅胶柱法纯化后的宣木瓜五环三萜酸对枯草芽孢杆菌的最低抑 1  菌浓度为 6.25%，即 1.56mg/mL。通过比较不同 pH 值条件下纯度为 41.41%宣木瓜粗 提物原液对枯草芽孢杆菌抑制效果的影响，结果发现：宣木瓜五环三萜酸在酸性条件 下 （pH3左右）抑菌效果最好；通过比较不同温度处理纯度为 41.41%五环三萜酸宣木 瓜粗提物原液对枯草芽孢杆菌抑菌效果的影响，结果表明：宣木瓜五环三萜酸的热稳 定性相对较好。 关键词：宣木瓜；五环三萜酸；制备型高效液相色谱；提取分离；抑菌 2  Abstract  Chaenomeles speciosa S. Nakai(called Xuancheng pawpaw)is a kind of fruit with a  medicinal function,it is rich in nutrients and abundant of active substances.Especially,it is  rich  in  organic  acids(OA)  an