应用蛋白质组学技术鉴定胃癌分化相关蛋白及其Serpin+B1表达和机制研析.pdf

中文摘要 i nB1 应用蛋白质组学技术鉴定胃癌分化相关蛋白及Serp 表达与机制的研究 摘 要 胃癌是常见的恶性肿瘤，其致死率居全球癌症死亡原因的第二位，而 在我国胃癌居恶性肿瘤死亡原因的首位。即使患者接受了标准的根治性切 除手术，术后进行规范化的治疗，进展期胃癌的5年生存率仍然徘徊在 30S,-一40％左右。影响胃癌预后的因素很多，其中肿瘤细胞的分化程度起 着十分重要的作用。不同分化程度的胃癌细胞，其增殖分化、侵袭转移的 能力有所不同，肿瘤细胞的分化程度也可随肿瘤的进展而发生变化，如果 这个过程可以通过干预某些基因或者信号通路达到抑制甚至逆转的目的， 将会对患者的预后起到积极的作用，这是本实验设计的初衷。 分支，是以基因编码的所有蛋白质组为研究对象，在整体水平上分析细胞 内动态变化的蛋白质的组成成份、表达水平及修饰状态，了解蛋白质之间 的相互作用与联系，从而揭示蛋白质功能及其与细胞生命活动规律的关系 以及基因表达调控机制的一个新的研究领域，其核心技术是以双相凝胶电 泳(Two．dimensional polyacrylamidegel 白质分离技术和以质谱(mass 度、高分辨率、可重复性强、高度自动化等优势，非常适合对蛋白质进行 大规模的平行分离和分析，配合相应分析软件和数据库，可以在短时间内 处理大量的数据。 正因为如此，蛋白质组学技术在肿瘤研究中的应用成为热点，针对胃 癌患者细胞、组织、血清、胃液的蛋白质组学研究屡见报道，内容也覆盖 诊断、治疗、功能机制等多个方面。研究发现，胃癌的某些基因及其表达 产物确会随疾病的发生发展而产生变化，并通过特定途径影响肿瘤的侵 袭、转移等一系列过程。但在针对组织进行的研究中，大多是将胃癌组织 织中高表达，其可能通过影响某些促癌基因和抑癌基因的相互作用而影响 中文摘要 胃癌的发展，是胃癌潜在的诊断标志物之一；Cai等发现胃贲门癌易出现 转移，可能与糖代谢途径中某些酶类代谢异常有关，受此影响丙酮酸进入 三羧酸循环的量明显增多，并促进肿瘤细胞的生长和转移，抑制该途径可 为胃癌治疗提供潜在的靶点。除此之外，蛋白质组学技术应用于不同分化 胃癌组织的对比研究却非常少见，因此本实验在前期工作的基础上进一步 对不同分化程度胃癌组织中的差异蛋白进行分离鉴定，具有较强的先进性 及临床实用价值。 实验的第一部分到第二部分使用先进的双向荧光差异凝胶电泳技术 fluorescencedifference (Two．dimensional gel 结合LTQ离子阱型质谱仪对不同分化程度胃腺癌组织的差异表达蛋白质 进行筛选鉴定，去除结构蛋白及功能非特异性蛋白后确定6种可能与胃癌 分化有关的蛋白质，为丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(serine proteaseinhibitor, clade B．member B1)，钙磷脂结合蛋白III(annexinA3)，转录 1，Serpin In And Phosphoribosyltransferaseapo Amp)，谷胱甘肽巯基转移酶Pi．1 对Serpin B1)在肿瘤中的 达进行了验证。考虑到丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(Serpin 研究相对较少，并可能与一些肿瘤的侵袭和转移能力有关，因此第四至第 B1在胃癌 B1进行了更深入的研究，进一步验证了Serpin 五部分对Serpin B1与胃癌临床生物