bmp2基因转bmsc与epc复合于纳米硫酸钙藻酸盐支架修复大鼠骨缺损的实验研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 酸盐支架修复大鼠骨缺损的实验研究 苛言 莉 昌 由于外伤、肿瘤术后及先天畸形等原因常造成颌骨组织缺损，导致咀嚼功能 丧失、影响面部美观。为了满足修复治疗的需要，广大学者尝试了大量骨组织缺 损修复的方法，组织工程构建人工骨是修复骨缺损较为理想的方法之一【l21，其基 本方法是将体外培养扩增的种子细胞，接种于合适的支架材料中形成复合物，植 入机体，随着支架材料的降解，种子细胞持续增殖分化，直接参与，并分泌基质， 释放必须的细胞因子，从而加速骨缺损的修复【3】。目前骨组织工程技术取得了较 大的进展，但仍存在一些问题，如骨形成的量有限，难以构建大块骨组织，成骨 的速度比较慢，不能较早行使功能等【l】。 研究发现，组织工程化骨植入体内早期营养主要来源于组织液的渗透和血液 的融附，进入支架内深度有限，中央的细胞供血和供氧受到限制。植入体内后内 部细胞可因营养成份缺乏而导致细胞变性坏死。单纯人工骨构建方法存在静态培 养条件下厚度受限，无法对于大面积缺损进行重建。 随着组织工程技术的进展，有学者提出了血管化人工骨的设想，即在以往基 础上，通过各种方法将血管形成引入人工骨的构建，促进其早期形成血管组织并 为形成的骨组织提供营养【4J。血管化能将成骨细胞前体细胞、相关生长因子、营 养物质等携带到局部微环境中，并带走局部代谢产生的废物及坏死分解产物【5】。 因此，血管化在骨组织工程中有重要意义，血管化人工骨成为具有广泛应用前景 的组织工程修复骨缺损方法[61。 骨的形成是由多种细胞和细胞外基质共同参与，受多种生长因子和激素调控 的复杂生理活动。构建血管化的组织工程骨，细胞选择是一个重要问题【71。 marrowstem 骨髓间充质干细胞(Bone cell，BMSC)是常用的骨组织工程干细 胞，具有高度的可塑性和多向分化潜能【8】，在体外具有高度的扩增能力，可被诱 1 导分化为骨、软骨、肌肉、脂肪和神经等组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后 仍具有多向分化潜能，是组织工程中一种理想的供体细胞【91。 内皮祖细胞(endothelialcells，EPCs)是出生后骨髓中存在的能够迁 progenitor 移到外周循环中的一群祖细胞，可以分化为成熟的内皮细胞。在胚胎发育的过程中， EPCs参与了最初的血管形成【101。成人中，内皮祖细胞定居于骨髓，并且可以被细 胞因子或者来自于外周血中的血管生长因子信号动员到外周循环而进入外周血管 组织中，通过整合进血管壁或提供生长因子两种方式来促使新生血管的形成【11】。 近年研究发现EPCs通过释放生长因子、炎症介质等内容物及直接与骨细胞接触， 参与骨形成和修复的生理过程【12】。有学者研究表明，EPC在组织工程化血管中起 着重要作用㈣。 我们将血管内皮祖细胞与骨髓间充质干细胞共培养，作为骨组织工程的种子 究使用该体系构建血管化骨的可行性。 材料和方法 一、实验材料 l、主要试剂、仪器 硫酸钙(Fisher,美国) 藻酸盐(Vwr，美国) MEM alpha(Gibco，美国) 胎牛血清(Gibeo，美国) TrypLEExpress(Invitrogen，美国) CellTiter 96⑧Aqueous(Invitrogen，美国) 戊二醛(Sigma，美国) O．1M磷酸缓冲液(Sigma，美国) 六甲基--@胺烷(HMDS)(Sigma，美国) Ficoll—Paque单核细胞分离液(GE，美国) DNA 引物(Intergrated technologies，美国) SuperScript PCR试剂盒(invitrogen，美国) 2 碱性磷酸酶探针试剂盒(Abeam，美国)