姜黄素对涎腺腺囊性癌细胞系SACC-83增殖和凋亡的影响.pdfVIP

中文摘要 姜黄素对涎腺腺样囊性癌细胞系SACC．83 增殖和凋亡的影响 摘 要 adenoid 目的：涎腺腺样囊性癌(salivarycystic 具有侵袭性强、浸润性生长、早期沿神经血管束向远处扩展 和转移等特征。目前临床对于sACC的治疗仍以手术切除为 主，但手术治疗难以彻底切除，术后复发率较高，远期疗效 较差，对放疗不敏感，传统的化疗药物效果不显著，因此， 探索新的治疗方法成为学者们关注的焦点，利用从植物中提 取的有效成分抑制肿瘤细胞的增殖和诱导其凋亡成为目前 提取、分离出的一种酚类色素成份，曾在印度被用于炎症的 治疗。近年实验研究发现姜黄素具有抗肿瘤作用，机制还不 完全清楚，可能与抑制肿瘤细胞的增殖和诱导其凋亡有关。 目前国内外，尚未见姜黄素作用于SAcc的研究报道。本实 验是探讨姜黄素抗SAcc的作用，并探索其机制，为SAcC 的治疗提供新的思路和方法。 材料与方法：1．材料(1)细胞系：SACC．83，购自北京 大学医学部口腔颌面外科实验室，由北京大学医学部口腔颌 面外科于1983年建立。(2)姜黄素：对照品，中国药品生 物制品检定所提供。2．方法：(1)培养器械的处理。(2)药 液配制：姜黄素用无水乙醇溶解配制成20m∥ml储存液，使 中文摘要 于37℃、5％c02恒温箱内饱和湿度培养，24～48小时传l 代，以0．04％二乙胺四乙酸二钠(EDTA)和0．25％胰蛋白 酶(1：1)混合液消化传代。(4)MTT比色试验：取对数生 长期细胞制成2×107·L。1细胞悬液，接种于96孔板，每孔 10、15、20mg几，设对照组和调零孔，每组6个复孔。继续 再培养4h后小心吸去全部上清液，然后每孔加入200ul的 二甲基亚砜(DMSO)，振荡摇匀，使结晶充分溶解。置酶标 仪上测各孔吸光度值，并计算生长抑制率。(5)倒置相差显 微镜观察：将细胞接种于50m1培养瓶中，观察细胞在空白 培养基和含药培养基中不同培养时间的生长状况。(6)光镜 观察：将细胞接种于6孔板中，孔中放置盖玻片，爬片成功 后加入空白或含药培养基，培养不同时间后，Giemsa染色， 光镜观察。(7)流式细胞术检测：用空白培养基和不同浓度 的含药培养基处理细胞不同时间后，用Annexin—v．FITc和 PI双标记活细胞的方法检测细胞凋亡。(8)透射电镜观察： 于4℃离心收集正常培养细胞和药物处理细胞5×106～1× 10 7个，PBS液洗2次，固定、脱水、包埋、切片和染色均 按常规处理，透射电镜观察。3．统计学分析：使用sPSSlO．0 统计学软件，应用sNK．q检验、相关分析、f检验对细胞 生长抑制率和凋亡率进行统计学分析。 结果：1．MTT比色试验：姜黄素(5mg几以上)对 SACc-83细胞具有明显的生长抑制作用，药物作用24h、48h、 72h后的IC50分别为13．8 mg／L、11．2mg／L、8．2mg几；最大 中文摘要 生长抑制率可达90．9％。经统计学分析，各时间组不同浓度 不同处理时间之间生长抑制率不同(P0．01)，药效与药物浓 度和作用时间具有明显的正相关性。2．倒置显微镜观察：对 照组细胞贴壁生长，扁平多角形，胞质饱满，近中央处有圆 形的细胞核，呈“铺路石”状生长，生长迅速；用药组细胞 生长明显减慢，可见有细胞脱落，贴壁细胞变圆，甚至皱缩 变小，连接松解，核颜色加深，细胞折光性增强。3．光镜观 察：对照组细胞核浆比大，多个核仁；用药组胞质浓缩，核 浆比例降低，核仁减少或消失，出现染色质沿核膜内侧排列 的核边集现象，可见核碎裂现象。4．流式细胞术检测：对照 组细胞也有凋亡，但凋亡率很低；用药组细胞明显凋亡，凋 亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升，药物浓度达到 10mg几时细胞凋亡明显增加，经统计学分析，各时间组和各 浓度组之间有统计学差异(pO．01)。5．透射电镜观察：对照 组细胞完整，核仁大而明显，微绒毛和内质网丰富，未找到 凋亡细胞；用药组细胞膜表面微绒毛消失，体积变小，胞质 浓缩，染色质凝集、固缩，聚集于核膜下呈境界分明的块状 或新月体形，有的可见核碎裂及凋亡小体的形成。