应用RNA干扰术沉默转化生长因子-β1基因对舌鳞癌细胞增殖活性及iNOS表达影响的实验研究.pdfVIP

应用RNA干扰技术沉默转化生长因子-0J基因对舌癌细胞增殖活性及训Os表达影响的实验研究 应用RNA干扰技术沉默转化生长因子一B1基因对舌 癌细胞增殖活性及iNOS表达影响的实验研究 专业：口腔临床医学 研究生：白植宝 导师：陈伟良教授 中文摘要 cell 舌鳞状细胞癌(Tonguesquamous 肿瘤之一，约占头颈部肿瘤的40．50％，目前主要的治疗手段是手术、放疗及化 疗，但总的治疗效果不理想，5年生存率只有60％左右，且患者生存质量不高。 癌的发生是一个多因素、多阶段、复杂渐进的过程，干预或终止其中某个或 多个相关因素或过程，能够改变癌发生发展的进程，达到化学预防和治疗的目的。 针对肿瘤生长相关因子，在基因水平进行干预，是恶性肿瘤的基因治疗策略。 转化生长因子．B是一类具有多种生物学效应的多肽类细胞因子超家族，对机 体许多组织细胞生长和分化具有重要的调节作用，其中转化生长因子81最为重要， l，其刺激新血管生 机体多种细胞能分泌产生。许多肿瘤组织和细胞高表达TGF-B 成，细胞迁徙及细胞外基质堆积，导致肿瘤的发生、发展和浸润转移。头颈部肿 瘤中TG卜9l的表达比正常组织中的表达要高：有淋巴结转移者较之无淋巴结转移 要高得多。 NO在体内起重要的信号传到作用，NO与其合成酶一诱导型一氧化氮合酶(iN0s) 在肿瘤发生发展有很多分子机制发挥作用，促进肿瘤血管生成、抑制细胞调亡等。 头颈部肿瘤中iNoS的表达升高明显，与TGF-81关系密切，参与肿瘤新血管形成、 细胞外基质堆积，共同促进肿瘤的发生发展，促进肿瘤的转移浸润。 RNA干扰(RNA 府用RNA十扰技术沉默转化生长凼于-Bl基冈对舌癌细胞增殖活性及lNOs表达影响的实验研究 其广泛存在真核生物中，是生物体在进化上的一种保守的基因组水平的免疫监控机 制。具有高度特异性、高效率、放大效应并可遗传的特点。因此针对肿瘤基因在 肿瘤细胞内引发RNAi效应，将可能开辟肿瘤基因治疗的新途径。 l 本研究以人舌鳞癌Tea8113细胞为研究对象，探讨RNA干扰技术沉默TGF—B 基因后对Tca8113细胞增殖活性及iNOS基因表达的影响。主要研究方法和结果有以 下几方面： 1．RNA干扰技术沉默TGF．13 1基因对舌鳞癌细胞增殖活性影响。 根据siRNA设计原则，设计针对TGF一13l基因的siRNA，予以化学合成， 应用脂质体LIPOFECTAMlNE 2000介导转染Tea8113细胞，并设置阴性对照组 和空白对照组。用MTT法、免疫细胞化学及流式细胞仪分别检测各组细胞。绘 制细胞生长曲线，显示转染特异性TGF．B l基因siRNA片断后，细胞生长受抑 制昵显；免疫细胞化学显示TGF一13 l蛋白表达降低；流式细胞仪检测发现沉默 TGF．B l基因后，细胞凋亡明显增加。 2．TGF—B l基因沉默对Tea8113细胞VEGF及iNOS表达影响 Tea8113细胞细胞培养后，转染特异性TGF．13l基因siRNA片断并设置阴性 对照组。以RT-PCR法检钡gTGF-6l基因沉默后VEGF及iNOS基因表达。结果显示 基因沉默后TG卜13 1、VEGF基因表达下调明显，且iNOS基因表达也随之下调。 结论 1．舌鳞癌TcaSll3细胞中TGF．§1高表达； 2．通过RNAi可以降低TGF．口1基因的表达，达到基因沉默的效果； 3．RNAi沉默TGF．13 的细胞增殖活性； 4．TGF-13 l和VEGF和iNOS之间存在着密切联系。TGF一13l基因沉默可以降低 TcaSll3细胞中VE