应用基因芯片技探讨口腔扁平苔藓发病机制的研究.pdfVIP

∥。．小 目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 研究论文应用基因芯片技术探讨口腔扁平苔藓发病机制的研究 前言…………………………………………………………………刖看………………………………………………………………… 88 材料与方法……………………………………………………………9 结果……………………………………………………………………15 附图……………………………………………………………………17 附表……………………………………………………………………19 讨{仑……………………………………………………………………25 结论……………．．．…………．．-……………………………………．3l 参考文献………………………………………………………………32 综述…………………………………………………………………………35 致谢…………………………………………………………………………44 个人简历……………………………………………………………………45 中文摘要 应用基因芯片技术探讨口腔扁平苔藓发病机制的研究 摘 要 目的：口腔扁平苔藓是一种常见的非感染性口腔黏膜疾病，不易治愈， 有一定的癌变倾向。该病好发于中年人，多见于40岁以上妇女，随年龄增 长症状加重。该病病因不明，发病机制错综复杂。近年来，口腔扁平苔藓 的癌变病例报道呈上升趋势，因此，对口腔扁平苔藓发病机制的研究成为 口腔医学研究的热点。基因芯片技术是目前国际上兴起不久且发展迅速的 一项生物技术，它在生命科学领域扮演着越来越重要的角色。基因芯片技 术是目前基因研究方面最先进、最有效的方法之一，随着生物学技术的发 展，基因芯片技术越来越广泛应用于疾病发病机制的研究，从而发现差异 表达基因。本实验应用基因芯片技术筛选口腔扁平苔藓与正常口腔黏膜组 织差异表达基因及其信号传导通路，分析口腔扁平苔藓发病相关的差异表 达基因和信号传导通路，进而对口腔扁平苔藓的发病机制进行深入研究。 方法： 1样本采集 所有病变组织均来源于2008年5月至11月河北医科大学第四医院口 腔科临床诊断为口腔扁平苔癣的患者，并经知情同意取病理时切取少量病 min 变黏膜(组织病理诊断为口腔扁平苔藓的继续保留)。标本于切除后10 内装入经无菌DEPC处理的冻存管中，然后储存于液氮罐中转运到低温冰 箱中保存。对照正常组织来源于河北医科大学第四医院口腔科无菌条件下 健康者拔智齿时切除的龈黏膜或口腔整复术中切除的口腔黏膜，保存方法 同OLP组织标本。 2芯片的制作 由上海康成技术有限公司提供的含有32050个基因的高密度基因组 芯片(phalanx台湾)。取适量(50～100mg)正确保存的OLP组织样本 6匀浆后抽提RNA。 am、260 nm和280am的吸 使用Nanodrop测定RNA在分光光度计230 收值，以计算浓度并评估纯度。用甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳， 中文摘要 格以保证后续芯片实验结果的可靠性。使用Ambion的RNA 针和高密度基因组芯片进行杂交。 3芯片扫描和图像分析 使用GenePix4000B芯片扫描仪扫描芯片的荧光强度，并将实验结果 Pro 转换成数字型数据保存，使用配套软件(Genepix 的差异表达基因和通路，以表达差异2倍为阳性，为有统计学意义。 4RT-PCR验证结果的可靠性 本实验为了排除实验结果中筛选差异基因的错误和假阳性，对