成釉细胞瘤端粒度及与hTERT表达相关性的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 成釉细胞瘤端粒长度及与hTERT表达 相关性的研究 目 的 端粒由DNA重复序列和特定的端粒结合蛋白相结合而形成的核染色质组成， 防止染色体融合，重组及降解，维持其完整性和稳定性。端粒的短缩及端粒的失 能会导致染色体末端发生融合及重组，增加基因的不稳定，从而引发肿瘤的形成。 端粒酶是一种细胞核糖核蛋白逆转录酶，能延长端粒长度，维持端粒的稳定和染 色体的完整。端粒酶激活是细胞永生化和恶变的重要一环，近乎90％的肿瘤中都 有端粒酶的激活。本研究采用荧光原位杂交技术对成釉细胞瘤进行端粒长度的检 测，并探讨其与hTERT及成釉细胞瘤生物学行为的关系。 材料与方法 1、研究对象 荧光原位杂交所用标本取自中国医科大学附属口腔医院及第一医院病理科 例)，正常口腔粘膜(牙龈、颊)10例，口腔鳞癌12例。 2、实验方法 荧光原位杂交：石蜡切片经常规脱蜡、水化，抗原修复，蛋白酶K消化后乙 醇脱水，滴加杂交液，盖玻片覆盖，90℃共变性，室温避光杂交，DAPI复染细 胞核后甘油封片。 hTERT免疫组化：石蜡切片经脱腊、水化，过氧化氢封闭后抗原修复，马血 清封闭后，一抗过夜，二抗lh，三抗SP．APlh，NBT．BCIP显色，甲基绿复染。 ki67免疫组化：石蜡切片经脱蜡水化，抗原修复。一抗鼠抗人ki67核抗原单 克隆抗体及LSABrM+／HRP试剂盒购自Dako公司，DAB显色。 3、结果判定 荧光原位杂交结果判定：FISH切片的数字图像由设于荧光显微(Olympus， Advanced CX61，日本)上的数码相机拍摄，用Motic 3．2图像分析软件包对 Images 图像的荧光端粒信号光密度值进行定量。在每例切片中随机选取若干细胞，计算 每个细胞的端粒荧光信号光密度值与其DAPI荧光信号的比值，然后计算这些细 胞的比值的平均值作为本例的端粒长度值。 细胞着色定为阳性，依据染色强度分为弱阳性(+)，中度阳性(++)，强阳性(卅)。 ki67免疫组化结果判定：以明确的细胞核棕色或深褐色着色者为阳性染色。 指数LI记为阳性染色细胞／细胞总数×100。 4、统计学分析 水准a=0．05，pO．05为有统计学意义。 结 果 1、成釉细胞瘤端粒长度的检测 荧光原位杂交分析结果表明，89例成釉细胞瘤上皮细胞端粒平均长度为 2、成釉细胞瘤中hTEI盯的表达 89例成釉细胞瘤中64例hTERT均为阳性，表达率为71．9％，阳性表达以 中度为主，主要位于外周柱状细胞或立方状细胞中，且在胞核及胞浆呈弥散分布。 与成釉细胞瘤相比，10例口腔正常粘膜中除2例hTERT呈中度表达外，其余8 例均为阴性，12例口腔鳞癌hTERT表达均为阳性，三组hTERT阳性率及表达强 2 表达强度之间亦具显著差异(r=55．202，P=O．000)。 3、成釉细胞瘤端粒长度与hTERT表达之间的相关性 按hTERT的表达强度对将成釉细胞瘤分为三组，hTERT(．)组端粒平均长度 随着hTERT表达的增强，端粒长度有增长的趋势，但这一差异无统计学意义 (F=J．984，P=O．144)。 4、成釉细胞瘤中ki67的表达及与端粒长度和hTERT表达的相关 性 ki67阳性染色的部位为细胞核，呈深棕色或深褐色，阳性染色细胞以肿瘤上 皮细胞为主，星网状细胞阳性染色相对较少，间质细胞偶有阳性表达。不同组织 学类型成釉细胞瘤中ki67表达无差异(弘n 长度呈现负相关的趋势(，．=一0．151，P=0．23I)。伴随成釉细胞瘤的复发与恶变， 组间差异具统计学意义(弘丘粥J『，P=D．030)。 结论 成釉细胞瘤中端粒的短缩和hTERT的表达可能与成釉细胞瘤的生物学行为 相关，且成釉细胞瘤中可能存在非端粒酶依赖的端粒延长机制