Ara-C在酵母菌、白血病细胞与AML小鼠模型中的抗性的研究.pdfVIP

2 Ara-C 在酵母菌、白血病细胞及AML 小鼠模型中的抗性研究 中文摘要 中文摘要 目的：以酵母菌、白血病细胞、非免疫缺陷AML 小鼠为模型，寻找Ara-C 抗 性相关基因，研究Ara-C 代谢通路中关键基因DCK 的变化以及耐药相关的抗凋亡 途径的变化。 方法： （1）piggyBac (PB) 转座系统中的质粒构建，将 PB 转座子元件中的 PB 转座酶序列和识别序列分别连接到两个穿梭质粒中；（2 ）YHL912 菌株对G418 的敏感性检测；（3 ）采用醋酸锂转化法，将构建好的PB 表达质粒、供体质粒分 别转入YHL912 裂殖酵母中；（4 ）运用MTT 法检测细胞对药物的敏感性；（5 ） AnnexinV-FITC 和PI 双染法检测ABT-737 对白血病细胞凋亡的影响；（6 ）采用 AML 小鼠模型，研究ABT-737 与Ara-C 的联合使用，对小鼠生存情况的影响。 结果：（1）PB 转座系统能够有效地插入酵母基因组中；（2 ）G418 对YHL912 酵母菌株的最小抑制浓度为300ug/mL；（3 ）DCK 基因在具有Ara-C 抗性的AML 细胞中，存在点突变、缺失突变，表达降低等现象，随着抗药程度的增加，突变 比例呈升高趋势；（4 ）ABT-737 的联合使用能够有效的改善因细胞内部抗性而导 致的AML 小鼠生存期缩短的现象。 结论：PB 转座子二元转座系统能够有效地插入酵母基因组中，从而为下一步 筛选耐药突变菌株，寻找耐药相关的新基因提供了基础；DCK 基因在具有 Ara-C 抗性的AML 细胞中，存在点突变、缺失突变，表达降低等现象，这可能是导致抗 药性产生的一个重要原因；抗凋亡蛋白抑制剂ABT-737 的联合使用能够有效的改 善因细胞内部抗性而导致的生存期缩短的现象，说明白血病细胞具有化疗药物抗 性后，仍保持对抗凋亡通路的敏感性。 关键词：PB 转座子，酵母，AML 细胞，DCK ，ABT-737 作 者：赵文俊 指导老师：尹 斌 I Abstract Study of Ara-C Resistance in Yeasts, AML Cells and Mouse Model Study of Ara-C Resistance in Yeasts, AML Cells and Mouse Model Abstract Objective: In yeast, acute myeloid leukemia cells, non-immunodeficient mice model for the study, to look for Ara-C resistance-related genes, study the changes of deoxycytidine kinase, which is Ara-C key genes in metabolic pathways, and of drug-related anti-apoptotic pathways. Methods: (1) The mutagenesis system available with piggyBac (PB) requires that two plasmids be introduced into t