甘草甜素对小鼠下腺纤维肉瘤移植瘤作用的实验研究.pdfVIP

中 文 摘 要 前 官 甘草是我国的传统中草药之一，自古以来就作为具有解毒功 效的中草药广泛应用于临床。它的主要水溶性物质是甘草甜素 (glycyahizinGL)，已被发现具有调节免疫功能、促进干扰素诱生 以及抗癌和抗病毒等多种药理作用，尤其是它的抗肿瘤作用近年 来逐渐受到了人们的重视。 目前，国内外学者较多研究的是甘草甜素在肝脏疾病方面的 防治作用，也可见到GL抑制皮肤癌的零星报道，但对其抗肿瘤作 用强度及作用机制报道甚少。尤其是甘草甜素对肉瘤的作用，除 葛淑芬报道的GL对体外培养小鼠领下腺纤维肉瘤细胞的作甩 外，尚未见到体内动物实验的报道。为了弥补体外实验的不凡 本实验以中草药甘草甜素作为研究目标，在体外研究的基础上， 用化学致癌剂诱发小鼠领下腺纤维肉瘤，再将肿瘤接种到同种小 鼠腋下，观察肿瘤生长曲线、抑瘤率及肿瘤细胞形态学改变来进一 步研究甘草甜素对纤维肉瘤的抑制作用，同时通过流式细胞仪对 细胞周期的分析观察进一步研究和探讨甘草甜素的抗肿瘤作用机 制，为将来的临床应用提供理论依据。 材料和方 法 随.选用6一8周龄雄性BALB/C小鼠70只，体重18一22克。 2.建立小鼠领下腺纤维肉瘤的动物模型:随机选取BALB/C 小鼠20只，按0.8mg/20g体重戊巴比妥腹腔注射麻醉后，于小鼠 领下切开，找到领下腺，切开被膜，按5mg/20g体重的盆将含有 ·1 · 10%的20一三甲基胆蕙橄榄油混合液注人小鼠领下腺内，缝合创 口。 3.建立小鼠领下腺纤维肉瘤腋下移植的动物模型:将诱发的 小鼠领下腺纤维肉瘤切成1mm,大小的瘤块放在庆大盐水中。将 50只BALB/C小鼠麻醉后，于小鼠一侧腋下切开，稍加分离埋人 瘤组织块缝合。 4.将50只移植肿瘤后的BALB/C小鼠随机分为5组，每组 10只，其中一组为阴性对照组，一组为阳性对照组，三组为不同剂 量的甘草甜素实验组(GL1组、GL2组、G1.3组)。 5.移植肿瘤24小时后，GL1组、GL2组、G13组分别腹腔注 射GL3.22mg/20g,1.66mg/20g,0.805mg/20g体重，阳性对照组腹 腔注射环磷酞胺2mg/20g体重，阴性对照组给等体积的生理盐 水。每日一次，共11天。 6.每周一次用游标卡尺测量移植瘤的最大径a和垂直于a的 最大横径b，求移植瘤体积V二二alb/12，绘制出移植瘤的生长曲 线。每周一次测量小鼠体重，计算体重减轻率。移植肿瘤六周后 处死动物，测量瘤重并计算抑瘤率IR=(1一实验组平均瘤重/对 照组平均瘤重)x100%，进行显著性检验。 7.细胞周期分析:将肿瘤组织取材，用PH7.4的PBS漂洗干 净后，用眼科剪尽可能将肿瘤组织剪碎，PH7.4的PBS液冲洗， 300目不锈钢筛网过滤，滤液(约loml)于试管中静置15分钟，取 上清液3ml置于离心管中，在高速离心机1500转/分离心5分钟， PBS清洗离心两次，75%酒精固定30分钟后离心，PBS清洗离心1 次，加0.1%Triton液5分钟后离心，弃去上清液，0.5~1.0ml的 碘化丙吮(PI)染色30分钟后在流式细胞仪上检测处于各个周期 的细胞数。 8.移植瘤的组织形态学观察:取新鲜肿瘤组织，用10%甲醛 固定，石蜡包埋，HE染色观察肿瘤细胞形态。同样用2.5%戊二 ·2 · 醛固定新鲜瘤组织，俄酸染色，制成电镜切片，通过透射电镜观察 细胞超微结构的变化。 结 果 1.移植瘤体积及抑瘤率:从肿瘤生长曲线可以看出:各组小 鼠肿瘤体积均有增加，其中阴性对照组肿瘤生长较快，体积较大， G13组次之，阳性对照组和GLl组、G12组小鼠的肿瘤生长较慢， 体积较小。GM组 、GL2组、G13组和阳性对照组的抑瘤率分别 为25.329o,39.41%,22.83%和45.67% 。与阴性对照组相比， 进行t检验，差异均有显著性(p0.05)。 2.体重变化的观察与体重减轻率:肉眼观察可见阳性对照组 小鼠在给药期间即出现腹泻，体重