硫酸锌及转化生因子-β对大鼠骨髓培养系中破骨细胞形成的影响.pdfVIP

中文摘要 硫酸锌及转化生长因子一13对大鼠骨髓培养系 中破骨细胞形成的影响 摘 要 目的：f锌对人类及动物的生长至关重要。锌缺乏可以 引起相应的骨生长及发育障碍。多种研究表明锌无论是 在体内还是体外实验中都有刺激骨形成及钙化的作用。 在体外实验中发现锌对骨吸收有抑制作用，可见锌对骨 代谢起着一定的生理调节作用。近期研究发现锌的化合 物能刺激体外培养的破骨Mc、T3-E．细胞产生转化生长因 子．B(TGF．B)，而TGF．13在体内骨吸收和形成中起着重 要调控作用。在体外培养中TGF．B则表现出对破骨细胞 分化的调节作用。j本实验目的是研究硫酸锌对大鼠骨髓 体外培养中破骨细胞形成的影响；TGF—B对大鼠骨髓体 外培养中破骨细胞形成的影响以及硫酸锌及TGF—B共 存时对大鼠骨髓体外培养中破骨细胞形成的影响，以期 了解锌与TGF．13之间的相互作用，从而为临床中应用锌 剂治疗骨代谢及发育障碍提供理论依据。 l方法；雄性四周龄sD大鼠处死后，取其全骨髓细胞 放入含有新生牛血清、青霉素(1000u／m1)、链霉素 (1000ug／m1)、10。8M I．25双羟维生素D3[1．25(OH)2D3]的 Q．MEM培养液中，再分别放入24孔培养板内置入37 ℃含5％二氧化碳饱合湿度的恒温箱中培育，细胞培养3 天，换去O．2ml旧培养液，然后培养四天，期间利用相 差倒置显微镜观察，以确定培养的细胞为破骨细胞，培 中文摘要 养7天后经TRAP染色用光学显微镜计数破骨细胞。培 养期间分为实验组和对照组，并且各自与对照组对比。 实验组： ①硫酸锌组：于培养初期加入硫酸锌，浓度分别为 10-8、10～、10—6和10—5M； @TGF．B组：于培养初期加入TGF．B，浓度分别为 10m、lO‘12、10’11、2．5×10川、5×10。11和7．5×10川M： ③硫酸锌和TGF．B组：于培养初期加入硫酸锌浓度 为10西M和TGF．B浓度分别为10‘12、10。1、2．5×lO‘11、 5×10州和7．5×10-ttM。 对照组：培养中不加任何试剂作为空白对照和单纯 “M)而不加硫酸锌作为对照。 硫酸锌和TGF．D在培养初期加入到培养系中。换液 时加入相应试剂。 结果：通过培养过程中观察确定培养板各培养孔内所 培养细胞为破骨细胞，培养7天后对24孔培养板中的细 胞进行TRAP染色，在光学显微镜下对阳性染色细胞(破 骨细胞)进行计数。 ①硫酸锌组：加入硫酸锌(10-s．10巧M)组与空白对照组 比较，破骨细胞数明显减少(P0．01)，破骨细胞减少数随 硫酸锌浓度增高而增加，在硫酸锌为IO。6I订时基本达到 峰值。 ②TGF-D组：加入TGF。B组与空白对照组比较，破 骨细胞检出数有明显差另tJ(po．o r)。当TGF．B为低浓度 (10‘13-10。1M)时与空白对照组比较，破骨细胞检出数明显 中文摘要 其它试验浓度都高，而当TGF一13为高浓度(2．5×10。1、 5×10。-、7．5×10。11M1时与空白对照组比较，最终的破骨 细胞检出数明显减少(P0．01)，并且随TGF．B浓度升高 破骨细胞减少的数目增加。 与空白对照组比较，破骨细胞检出数有明显增加 X 明显减少(P0．01)。加入TGF一13浓度为2．5×10。11、5 10。11、7．5X 10。11M时与空白对照组比较，最终的破骨细 胞检出数明显减少(P≮0．01)，而同时加入硫酸锌do省M) 胞检出数明显减少(Po．01)。3 ’ 结论： 1．硫酸锌对大鼠骨髓体外培养中破骨细胞形成有抑 制作用； 2．TGF-13对大鼠骨髓体外培养中破骨细胞形成有双