骨碎补对人牙龈纤维细胞增殖分化的实验研究.pdfVIP

中文摘要 骨碎补对人牙龈成纤维细胞增殖分化的实验研究 摘 要 目的：本实验通过体外原代培养人牙龈成纤维细胞，在 倒置显微镜下观察该细胞形态及生长方式，检测中药骨碎补 对牙龈成纤维细胞的增殖活性及细胞总蛋白合成的影响，为 今后中药骨碎补用于临床治疗牙龈及牙周疾病提供实验依 据。 方法：采用组织块法培养人牙龈成纤维细胞，在倒置相 差显微镜及光镜下观察其细胞形态。制备中药骨碎补煎液， 用MTT法和考马斯亮蓝染色法分别测定药物作用下细胞的 生长曲线及总蛋白合成等基本生物学特性，检测中药骨碎补 对体外培养的人牙龈成纤维细胞的增殖活性及细胞总蛋白 合成的影响。 l牙龈成纤维细胞的原代培养及生物学特性观察：河北 医科大学第四医院口腔科拔除的阻生健康牙齿上，切取少量 牙龈组织，将所取的牙龈组织立即放置于含有青霉素 100u／ml、100 p∥ml链霉素的预冷Hank’8液中。采用组织块 法培养人牙龈成纤维细胞。取第4代细胞胰酶消化，制成细 胞悬液，调整细胞浓度至1×104／ml，接种于96孔培养板。 每24h取3孔，吸弃培养液，胰酶消化，制成细胞悬液，计 数，取均值。连续观察7d，绘制牙龈成纤维细胞的生长曲线。 2骨碎补煎液的制备：自河北医科大学第四医院中药房 购买中药骨碎补，将骨碎补加入水中煎煮，过滤，用含2％ la FBS的培养液稀释到10，50，100，500，1000 g／ml的终浓 中文摘要 度，调pH至7．0～7．1，分装，4C保存备用。 3细胞增殖效应和细胞总蛋白含量的测定：取第4代细 X 胞胰酶消化，制成细胞悬液，调整细胞浓度至1 104／ml，接 种于96孔培养板，每孔100IJ．1，孵育24h后吸弃培养液。 分别将浓度不同的中药骨碎补煎液加入到培养2，5，8d的 牙龈成纤维细胞液中，MTT法及考马斯亮蓝染色法测定骨碎 补作用后的人牙龈成纤维细胞的增殖效应和细胞总蛋白含 量。 结果： l牙龈成纤维细胞形态学观察；牙龈成纤维细胞体外原 代培养成功率为100％，倒置显微镜下牙龈成纤维细胞呈长 梭形或纺锤形，为单核细胞，有长短不一的细胞突起，细胞 核为圆形或卵圆形，大多位于胞浆中央，细胞排列呈束状或 漩涡状。HE染色光镜下观察胞质丰满，嗜伊红，胞核嗜碱 性。 2人牙龈成纤维细胞的生长曲线：生长曲线略呈“S”形， 接种后第ld细胞数略有下降，第2d开始有所回升，但长 势缓慢。第3d开始曲线急剧上升，提示细胞生长速度加快， d。第6 进入对数生长期，这一状态持续至第5 d开始进入平 台期，细胞生长速度减缓。 ug，rnl范围内各浓度中药骨碎补组的牙龈成纤维细胞生长 p 速度均高于对照组，骨碎补煎液在浓度为100 g枷时对人 牙龈成纤维细胞增殖效果最为显著。随着作用时间的延长， 细胞的OD值逐渐增大，在第5天达到最大。不同作用时间 中文摘要 1000“酌_111范围内，骨碎补促增殖作用，显示出一个明显的 浓度依赖效应和时间依赖效应。 4骨碎补对人牙龈成纤维细胞总蛋白合成的影响：lO、 进人牙龈成纤维细胞总蛋白合成(P‘0．05)，且骨碎补对人 牙龈成纤维细胞总蛋白合成的促进作用显示出明显的浓度 依赖效应。 结论： l牙龈成纤维细胞体外原代培养成功率较高，可为牙龈 及牙周病的研究提供大量的种子