高Tlt;,gt;Wistar鼠模型矢状缝发育及IGF-IR的表达.pdfVIP

中文摘要 前 言 了 妙缝是头颅诸扁骨间致密结缔组织构成的连结。 颅缝除 额缝在两岁时闭合外，通常颅缝都在成年以后才闭合夕r颅缝早闭 是颅缝在发育过程中，发育和维持机制发生紊乱而过早骨性愈合。 颅缝早闭后，与早闭颅缝成直角方向的颅骨发育障碍，导致明显的 颅面畸形及一系列并发症。 闭的病理学基础尚未阐明。七 十年代有人报道，甲状腺激 异常的耍儿经常发生颅解闭于 在该实验中，我们利用腹腔注射T3而在幼鼠中制造一个高T3的 动物模型，从中进行局部各项影响因素的研究，探讨颅缝发育及早 闭的机理。 材料和方法 了取生后8天的Wistar大鼠60只，雌性，体重13一15g,60只 动物随机分为实验和对照两组，每组30只。实验组动物每日腹腔 注射0.1P,g/g的T3，对照组给等ti的空白对照液。动物统一标准 饲养。给药后20,30,60日分别处死实验及对照组动物各10只， 采血送放免及生化检测总几和Ca,P,ALP水平。颅骨做形态测 量。取矢状缝标本做HE、破骨细胞TRAP染色及IGF一IR免疫组 化染色。免疫组化切片采取专人双盲法阅片，以减小误差，根据染 色强弱划分为弱(+)，中等(++)，较强(+++)，强(+++ +)四个等级，每个时间点标本最后取平均值。 计量数据以均值(标准差)表示，用T检验和方差分析处理， 检验水平取。二0.05, 结 果 一、一般状态，总几水平，血中Ca,P,ALP水平 整个实验过程中，60只动物均健康，给毛组动物没有焦躁表 现。两组动物体重无显著差异，给T3组血中总T3水平与对照组 间有显著差异，大约是对照组的3一5倍。给戈组血中ALP水平 显著高于对照组，而血中Ca,P水平两组之间无显著差异。 二、颅骨形态测量 20日标本四项指标两组间均无显著差异。30日标本，人字点 与星点间距离给毛组要小于对照组(P0.05)，冀点与前自点间 距离，前自点与人字缝交点间距离，前伸额长两组间均无显著差 异。60日标本，翼点与前自点间距离，人字缝交点与星点间距离 给几组均小于对照组(P0.05)。前自点与人字缝交点间距离， 前伸额长两组间均无显著差异。 三、HE染色标本组织形态学观察 20日标本切片中，可见对照组和实验组矢状缝均较宽大，颅 骨内外板在颅缝区相连，使板障与颅缝被骨质所隔开。30日切 片，两组标本矢状缝比20日均有所变窄，颅骨增厚，对照组缝两侧 颅骨有少许重叠，而给T3组缝两侧颅骨重亚明显，两侧颅骨之间 仍为纤维结缔组织所分隔。60日标本，给几组鼠颅骨矢状缝标 本两侧颅骨重盈十分明显，对照组仍只有少许重叠。所有标本均 未发现颅缝融合。 四、破骨细胞TRAP染色 阳性染色为兰色背景下的胞浆内褐红色颗粒。在20日标本 中，两组标本矢状缝边缘的破骨细胞均较少，30日和60日标本 中，对照组矢状缝边缘破骨细胞活性明显高于给T3组。 五,IGF一IR免疫组化染色 阳性染色表现为揭染。在20日标本切片中，两组染色强度无 ·2 · 显著差异 ‘30日及60日切片中，给几组矢状缝的IGF一IR免 疫组化染色强于对照组。表现为颅缝边缘成骨前沿大量阳性染色 的成骨细胞，及颅缝纤维结缔组织中大量阳性染色的细胞。 讨 论 颅缝早闭的致病因素较多，代谢异常是重要病因之一。其中 甲状脾激素水平异常是常见的一种。70年代即有低甲用甲状腺 激素替代治疗的婴儿颅缝早闭的报道，表现为血中甲状腺激素水 平增高，颅缝早闭，而无全身代谢紊乱。由此我们设想制造一个高 甲状腺激素的动物模型，观察其颅骨发育，探讨颅缝发育异常的机 理。SadanoriAkita于1995年报道了该种Wistar鼠模型，并指出高 T3鼠其矢状缝融合加速。 在该实验中我们制造了类似的高飞Wistar鼠模型。我们选择 T3腹腔注射来创建该模型IT3和T4的生物学效应基本相