荧光定量PCR检测技术的研发进展要点.ppt

* 标本体积 磁性纳米颗粒分离方法可以靶富集基因，特别是对于低丰度的标本能够通过增大标本体积，提高检测的下限 提高敏感度 100倍。 * PCR仪 逐孔扫描检测模式检测准确性高，对低拷贝的标本检测有明显的优势，罗氏 cobas taqman 480 为逐孔扫描模式。安普利Genelight9800为逐孔扫描模式。 * 讲解一下扩增曲线的四个区，及理论数学模型建立的前提条件是各样本间包括标准品间的核酸提取效率一致。 * 用于定量的外部标准品有两种处理方式，一种是不经过核酸提取，直接进行扩增，其主要成分是裸露的质粒，因此无需进行细胞裂解核酸提取，这类标准品生成的标准曲线稳定，所以实际上不必每次都做标准品，做的话每次标准品Ct值也是差不多的。当然它的缺点是1无法消除核酸提取过程中的系统误差，举一个比较夸张的例子，比如说一把移液器不准了，取50ul的样本实际上只有25微升，这样取到的样本量就偏少，但标准品因为没有经过核酸提取而没有受到影响，这样会导致检测结果比试剂结果变为原来的1/2,第2是丢失了标准品的部分质控功能，标准品可以反映质控信息，因为此类标准品没有参与核酸提取，所以对核酸提取过程中出现的核酸丢失、抑制因素的存在、样本间交叉污染等无法进行监控。这些导致了使用这种标准品进行定量的精密性不好。 第二种是和临床样本经过相同的核酸提取操作的标准品，这类标准品就没有上述标准品