鲍曼不动杆菌耐药持留菌的形成机制的分析.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumanmii)是一种重要的院内感染致病菌， 能够引发呼吸道感染、泌尿系统感染等。鲍曼不动杆菌耐药问题一直是临床感染 治疗的最大障碍。持留菌的存在可能是其临床治疗失败和感染复发的真正原因， 同时也是导致耐药率不断上升的原因之一。近些年持留菌引起的耐药问题受到广 泛重视，鲍曼不动杆菌持留菌的基本特征及形成机制的研究对于更好的控制持留 菌引起的耐药及感染问题具有重要的指导意义，也为其他物种中持留菌的研究提 供理论依据。 本研究以鲍曼不动杆菌标准株ATCC19606为研究对象，开展鲍曼不动杆菌 耐药持留菌的基本特征及其形成机制的研究。首先检测了鲍曼不动杆菌的生长曲 线和抗生素抗性谱。生长曲线测定结果帮助确定鲍曼不动杆菌的对数期与平台期 的培养时间。抗性谱的测定结果与美国临床实验室标准化协会(CLSI)制定的 标准比较发现鲍曼不动杆菌标准株ATCC19606抗生素的抗性水平较低：对多数 果为后续实验时间点的选取和抗生素的选择提供了实验依据。 为了了解持留菌形成特点及规律，本研究首先优化了分离及定量鲍曼不动杆 菌的持留菌细胞的方法，比较了不同的生理状态下以及不同的抗生素压力条件下 鲍曼不动杆菌持留菌水平的差异情况。实验结果表明鲍曼不动杆菌在持留菌的形 成过程中具有与其他细菌类似的二相型死亡曲线，即大量敏感细菌快速裂解死亡， 而持留菌的量维持相对稳定。平台期的细菌菌群中含有的持留菌比例要显著高于 对数生长期，说明鲍曼不动杆菌的持留菌水平与菌株的生理状态密切相关。此外， 持留菌的形成呈现出十分明显的抗生素种类和浓度依赖性，不同的抗生素的死亡 曲线的情况大不相同，其中多粘菌素B(PB)与高浓度的妥布霉素(TOB)具 有消除持留菌细胞的能力。以上这些结果让我们对鲍曼不动杆菌持留菌的基本特 征有了进一步的认识。 借助生物信息学工具对721株己测序的鲍曼不动杆菌基因组中可能的II型 毒素．抗毒素系统(TA系统)进行了彻底的搜索，结果表明鲍曼不动杆菌持留菌 的中II型TA系统十分多样，包含至少15对的TA系统。我们挑选其中报道有 I 万方数据 鲍曼不动杆菌耐药持留菌的形成机制研究 另一方面，real．timePCR的方法对持留菌与非持留菌中II型TA系统的表达量进 明3类II型TA系统在持留菌形成过程中扮演重要角色。 为了更为全面的了解持留菌形成及恢复生长过程中起主要调控作用的基因 和通路情况，深入的认识持留菌发生及转化的调控机制，我们借助Miseq高通量 测序平台在转录组水平上对持留菌形成及恢复生长的整个过程中差异表达的基 因和基因所富集到的通路进行了分析。结果表明在加入抗生素的第一个小时和重 新培养的第5小时差异表达的基因数目最多，上调和下调2倍的基因数目分别是 898个、566个和704个、964个。差异表达的基因所富集的通路分析结果表明 碳水化合物代谢途径和能量代谢途径在持留菌形成和恢复生长过程中均有表达， 而异源物质的生物降解途径在持留菌形成阶段特异存在，推测异源物质降解相关 基因在持留菌形成过程中扮演了重要角色。聚类分析找到了一些在持留菌时期表 达量升高而在持留菌恢复生长时下降的基因，另外对4类TA系统的表达情况的 伏期(E1．E3)显著升高。这些基因可能在持留菌形成过程中发挥了重要作用。总 之，鲍曼不动杆菌持留菌的形成机制是极为复杂的，后续我们将进一步缩小这一 范围并开发有效的控制持留菌感染的新方法。 关键词：鲍曼不动杆菌：持留菌；细菌耐药；毒素．抗毒素系统 II 万方数据 Abstract Abstract Acinetobacterbaumanmi