白细胞介素33(IL-33)在肿瘤组织的表达及抗肿瘤作用的初步的分析.pdfVIP

白细胞介素33 （IL-33 ）在肿瘤组织的表达及其抗肿瘤作用的初步研究 中文摘要 中文摘要 【目的】分析非小细胞肺癌和乳腺癌患者肿瘤组织和癌旁组织 IL-33 分子 mRNA 的表达；建立分泌小鼠 IL-33 的基因转染细胞株，研究其特性并初步探讨分 泌于肿瘤微环境中的 IL-33 的抗肿瘤作用。 【方法】以临床病理确诊为非小细胞肺癌患者并手术切除的肿瘤及癌旁远端 组织共 33 对组织为研究对象，采用传统的 Trizol 法提取组织中总 mRNA ，逆转录 成 cDNA 之后通过实时荧光定量 PCR （qPCR ）方法检测癌组织与癌旁组织 IL-33 mRNA 的表达水平；通过GEO 数据库中检索关于 IL-33 分子在乳腺癌中表达的数 据；构建含有人 CD8信号肽基因序列的 IL-33 融合基因，经BamH I 和 EcoR I 双 酶切后插入 pCDEF3 真核表达载体构建成为 pCDEF3-IL-33 重组子，脂质体法以重 组质粒 pCDEF3-IL-33 和空质粒 pCDEF3 分别转染小鼠乳腺癌细胞株 4T1 ，经G418 长期加压筛选后，酶联免疫吸附测定法（ELISA ）检测基因转染细胞株培养上清 小鼠 IL-33 的分泌；采用活细胞计数和CFSE 掺入法检测基因转染细胞生长与增殖 + 的均一性；经 ELISA 法检测 IL-33 对效应性 CD8 T 细胞 IFN-分泌的促进作用； 将细胞株 4T1-vec 和 4T1-IL-33 注入小鼠乳腺脂肪层，构建荷瘤小鼠模型，监测肿 瘤生长大小，第 30 天处死小鼠观察其肺转移的情况。 【结果】经 qPCR 检测，统计学分析显示 IL-33 在非小细胞肺癌癌旁远端组织 的表达高于肺癌组织的表达量（P=0.01 ）；基于GEO 数据库的乳腺癌组织数据分析 显示，IL-33 在乳腺正常组织中的表达高于乳腺癌组织； 基因转染细胞 4T1-pCDEF3-IL-33 能稳定分泌小鼠 IL-33 分子，与 4T1 及转染了空质粒的 4T1-vec 细胞相比，其生长和增殖无差异（P0.05 ）；体外刺激试验表明，IL-33 能显著地促 + 进效应性 CD8 T 细胞 IFN-的分泌 （P0.05 ）；体内实验研究初步表明，