超表达拟南芥miR319a对矮牵牛形态发育的影响.pdf

目 录 目习乇…………………………………………………………………………………………………………．．1 摘要………………………………………………………………………………………I Abstract……………………………………………………………………………………………………………III 1 文献综述……………………………………………………………………………1 1．1植物miRNAs的概述…………………………………………………………．1 1．1．1植物miRNAs的发现……………………………………………………1 1．1．2植物miRNAs的生物合成………………………………………………1 1．1．3植物miRNAs的作用机制………………………………………………3 1．1．4 miRBase数据库…………………………………………………………3 1．1．5 miRNA靶基因的预测和鉴定…………………………………………一4 1．2植物miRNAs功能研究………………………………………………………．5 1．3拟南芥miR319及其靶基因研究进展…………………………………………7 1．3．1 AtmiR319基因概述……………………………………………………．．7 1．3．2AtmiR319靶基因TCP研究……………………………………………．8 2引言…………………………………………………………………………………………………………11 2．1研究目的和意义………………………………………………………………11 2．2技术路线……………………………………………………………………．．12 3实验材料与方法……………………………………………………………………．13 3．1实验试剂与仪器……………………………………………………………．．13 3．1．1实验材料………………………………………………………………13 3．1．2主要试剂………………………………………………………………．13 3．1．3各类抗生素和激素配制………………………………………………．14 3．1．4各类培养基……………………………………………………………．15 6 3．1．5主要仪器………………………………………………………………．1 3．2基本实验方法………………………………………………………………．．17 3．2．1植物材料的种植………………………………………………………．17 3．2．2 CTAB法抽提矮牵牛基因组DNA……………………………………17 3．2．3矮牵牛总RNA的提取………………………………………………一17 3．2．4第一链cDNA的合成…………………………………………………18 3．2．5连接产物转化大肠杆菌、PCR鉴定及测序分析……………………19 3．2．6农杆菌介导的遗传转化………………………………………………21 3．3．1基因克隆的引物设计…………………………………………………23 3．3．2 RACE技术克隆5’．端和3’一端cDNA序列…………………………23 3．3．3 hi．TAIL扩增启动子……………………………………………………24 3．3．4全长拼接………………………………………………………………．24 3．3．5生物信息学分析………………………………………………………．25 3．3．6荧光定量PCR分析……………………………………………………25 3．3．7荧光定量PCR引物设