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中lll大学硕Jj论文 亡】色念珠菌与人口腔I：皮细胞相互作用的研究：ALS基渊表达与|L-8分泌 白色念珠菌与人口腔上皮细胞相互作用的研究： ALS基因表达与IL．8分泌 硕士生：于爱敏 导师： 胡雁教授 专业： 口腔临床医学 中文摘要 白色念珠菌又称白假丝酵母菌，是一种重要的条件致病真菌，可导致皮肤、 黏膜及系统弥散性念珠菌病。随着器官移植、癌症患者侵袭性治疗的普及和艾滋 病患者的逐渐增加，I临床上口腔和系统性念珠菌感染越来越常见。念珠菌对宿主 的粘附是其致病的第一步，也是最关键的一步。明确其粘附机制，对预防及控制 白色念珠菌病具有重要意义。研究发现口腔念珠菌感染患者分离的念珠菌株 3683、系统感染患者血液分离的念珠菌株SC5314以及皮肤感染患者指甲分离的 念珠菌株3630，在小鼠感染模型中的致病力有较大的差异，不同菌株对黏膜的 粘附力和宿主的免疫应答不同可能足这种差异的原因之一。 白色念珠菌ALS家族基因是其粘附相关的重要基因。而念珠菌感染后，宿 主可产生细胞因子如IL．8，抵御其粘附和入侵。因此检测不同念珠菌感染后其 ALS基因表达及宿主分泌细胞因子的情况，有助于阐释白色念珠菌致病力差异 的原因，揭示白色念珠菌感染口腔上皮的作用机制。 目的：研究三株白色念珠菌对人口腔上皮细胞粘附能力的差异，并初步探讨这 种差异产生的原因。 xl 材料和方法：①分别取l×I07／ml三株念珠菌与l05／ml口腔上皮细胞(包括颊上皮 细胞和牙龈细胞)各0．5ml混合，37C孵育lh，收集混合物，离心。革兰染色，镜 下随机计数50个上皮细胞，计算每个口腔上皮细胞粘附的白色念珠菌数目。②三 小IIj大学硕-f：论文 白色念珠菌与人口腔I：皮细胞棚互作玎l的研究：ALS基闵表达与IL-g分泌 株念珠菌分别与口腔上皮细胞以10：l的比例混合培养，6h、12h和24h收集颊细胞 混合物，24h和48h收集牙龈细胞混合物，离心，去上清，保留沉淀物进行荧光定 量RT．PCR实验。③三株念珠菌分别与口腔上皮细胞以l：l的比例混合培养，6h、 12h和24h收集颊细胞混合物，24h和48h收集牙龈细胞混合物，离心，收集上清， ELISA检测细胞因子【L．8、IL—12分泌量。④三株念珠菌分别与牙龈上皮细胞以 收集样本，离心，沉淀物贮存于．80℃，荧光定量PCR检测ALSl表达量。所得数 据结果均用(i土s)表示，用SPSS统计软件进行统计学分析。 结果：①每个颊上皮细胞粘附的念珠菌数目不同，平均每个上皮细胞上粘附菌 株3683为14．6I+0．54，SC53 对上皮的粘附能力最强，与其余两株相比差别有统计学意义(p0．05)。②与颊上 珠菌ALSl一3表达量降低。牙龈上皮细胞组ALSl．3基因表达量均低于颊上皮细 胞组。③牙龈上皮细胞与三株念珠菌共培养后分泌IL．8量不同，IL．8分泌量24h SC5314组(207．07土：44．60)pg／ml，3630组(1 SC53 pg／ml；48h 泌量各组比较均无统计学差异p0．05)。颊上皮细胞不分泌细胞因子IL．8／IL．12。 @48h 和3683 ALSl表达量分别下调50％，51．1％，70．6％，与各自 菌株SC5314、3630和3683 同一时间点对照组比较，差异均有统计学意义po．05)。 结论：①三株念珠菌对颊上皮细胞粘附力不同，菌株3683ALSI．3表达水平最 高，说明该菌株对颊上皮细胞的粘附力最强。②牙龈上皮细胞与三株念珠菌培养 后，菌株表达ALS基因水平明显低于颊上皮细胞，表明念珠菌对其较弱的粘附 q1山大学硕士论文 白色念珠菌与人口腔l：皮细胞相互作用的研究：ALS基闪表达与lL．8分泌 能力，其原因可能是牙龈上皮细胞能产生IL一8抵抗念珠菌感染，但具体机制有 待迸一步研究。 关键词：白色念珠菌；口腔上皮细胞；RT-PCR；ALS基因：IL．8／IL．12 III 中IIJ大学硕1二论文 白色念珠菌与入口腔卜．皮细胞栩互作用的研