生物化学第十章分析.ppt

第一节 DNA的生物合成;一. DNA的复制;(一) 复制的反应;(二) 复制的方式;半保留复制;如何证明半保留复制;(二) 复制的方式;(三) 复制反应注意点;DNA聚合酶;DNA聚合酶;1. DNA聚合酶(DNA polymease);3→5核酸外切;5→3核酸外切;合成RNA引物，又叫引物合成酶、引发酶。; 3. DNA连结酶 (DNA ligase); 3. DNA连结酶 (DNA ligase); 4. 使DNA双螺旋解开的酶和蛋白质;单链结合蛋白(SSBP)： 与解链后的DNA单链结合，阻止其再次形成双螺旋。大肠杆菌SSB为177 aa多肽，以四聚体形式存在，与32个bp DNA区相结合，结合后的DNA 分子僵硬，不易?弯曲，有利于单链DNA分子的稳定，避免核酸酶进攻；同时降低了Tm值，进一步促进DNA的解链。;旋转酶(gyrase,untwisting protein)： 催化DNA的拓扑连环数发生变化。 可分为拓扑异构酶Ⅰ和拓扑异构酶Ⅱ。 Ⅰ型酶可减少负超螺旋；Ⅱ型酶可引入负超螺旋（此时需要ATP提供能量）。具有内切酶和连接酶活力，参与DNA复制前双螺旋的松弛及复制后超螺旋的再恢复。?;dn??蛋白(mobile promoter)： 功能：识别DNA的合成的起始位置，与引物酶及其它一些蛋白组成复合体启动RNA引物链的合成。;（五）复制的过程; 复制过程的调控主要取决于复制启动的频率，而DNA延长的速度大体上是恒定的。由于真核生物在多位点上启动复制，所以尽管其DNA比原核生物DNA大得多，但复制的总速度反而比原核生物快。 ; 2. 复制眼的形成;复制眼的结构：?; 2. 复制眼的形成-双螺旋解开的过程;（五）复制的过程;3.复制叉的推进; 另一条链延伸的方向与复制叉前进的方向相反，它显然不能被连续合成，需要复制叉推进了一定的长度，有了一段DNA单链后，才能以此为模板合成一个片段。因此这条新链的合成是不连续的，而且总晚于先导链，所以称为随后链。; 这种前导链连续合成，随后链断续合成的方式，称为半不连续复制。 随后链中合成的多个DNA片段，称为冈崎片段。冈崎片段的长度原核细胞中约1000~2000个核苷酸，真核细胞中约100~200个核苷酸。?; 引物酶在复制原点附近合成一段RNA引物； DNA聚合酶Ⅲ (原核细胞)在引物的3末端逐个添加脱氧核苷酸。 随着复制叉的推进，亲代DNA双螺旋不断被解开，先导链也不断延伸。?;② 随后链的合成;② 随后链的合成;③ 先导链和随后链中DNA的延伸由同一个DNA聚合酶Ⅲ全 酶二聚体催化;4.复制的结束;4.复制的结束;5.端粒复制;5.端粒复制;（六）DNA复制的忠实性;二. DNA的损伤与修复;1. DNA损伤的原因; 2. 修复; 2. 修复; 2. 修复; 2. 修复; 2. 修复; 2. 修复;三. DNA突变; 1. 类型;第二节 RNA的生物合成;1. 转录的反应;特点： 不对称转录--我们将用作RNA合成的模板的链叫做反义链；另一条不做模板的链叫有义链。RNA为全保留转录 转录开始不需要引物，链的延长方向也是 5′→ 3′ RNA聚合酶对利福平敏感 ;;2. 转录的方式;1.转录的酶;亚基组成：a2bbws = a2bbw + s? 全酶 核心酶??; DNA上存在着转录的起始信号，它是特殊的核苷酸序列，能被RNA聚合酶识别、结合并确定转录启始位点的特定序列，称为启动子（promoter）。转录是由RNA聚合酶全酶结合于启动子而被启动的。 ;The nucleotide sequences of representative E. coli promoters ; 聚合酶全酶上的s因子能识别启动子，并识别有义链，从而使全酶定位到启动子部位。; 由全酶在启动子附近将DNA局部解链，约解开17个碱基对。（酶与启动子结合的部位是AT富集区，有利于解链）?; 当s因子从核心酶上脱落后，核心酶与DNA链的结合变得疏松(依靠其蛋白质的碱性与酸性核酸之间的非特异性的静电引力)，可以在模板链上滑动，方向为DNA模板链的 3′→ 5′，同时将核苷酸逐个加到RNA链的3-OH端，使RNA链以 5′→ 3′方向延伸。; DNA上的解螺旋区：在RNA链延伸的同时，RNA聚合酶继续解开它前方的DNA双螺旋，暴露出新的模板链，而后面被解开的两条DNA单链又重新形成双螺旋，DNA上的解螺旋区保持约17个碱基对的长度。; RNA-DNA杂交区：刚合成出来的RNA链与解开的DNA模板链之间可形成一小段RNA-DNA杂交区。随着核心酶的移动，RNA链