乙体氯氰菊酯对鼠脑组织γ-氨基丁酸含量及其相关酶和受体影响的实验研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 乙体氯氰菊酯对小鼠脑组织产氨基丁酸含量 及其相关酶和受体影响的实验研究 刖 菁 具有高效、低毒、在哺乳动物体内代谢和排泄迅速、环境中残留较少等特点，而广 泛用于防治农业、林业及家庭中的害虫。 PD作为神经毒物，其广泛使用所造成的神经毒性的研究已成为农药毒理学和 神经毒理学研究的热点。神经递质是突触传递的重要组成成分，神经递质代谢的 异常可严重干扰突触内信息的传递，继而严重影响神经系统的功能与动物行为。 有学者认为，PD可调节突触前膜多种神经递质的释放和突触后膜神经递质功能。 acid，GABA)是脑内主要的抑制性神经递质，广 弘氨基丁酸()，．aminobutyric 泛分布于整个神经系统中，它能介导抑制性突触传递作用，从而防止脑内神经元 过度兴奋，GABA系统功能失调可导致中枢神经系统功能的异常和焦虑管理失调。 在动物体内，脑组织中的GABA含量稳定，先是谷氨酸脱羧酶催化谷氨酸(gluta— 保持GABA系统的稳定，从而维持中枢神经系统的正常功能。由此可见，谷氨酸 脱羧酶和GABA．T对维持GABA的功能起着重要的作用。有文献报道溴氰菊酯染 毒大鼠，其脑组织GABA浓度明显升高；低剂量的丙烯菊酯可使海马GABA水平 下降，而高剂量丙烯菊酯则可使海马GABA的水平上升；一次性经口给予溴氰菊 酯，大鼠大脑皮层、海马和小脑的GABA．T活力下降。我们以往的研究发现，乙 体氯氰菊酯染毒小鼠2h后，经分光光度法检测小鼠脑组织GABA水平增高、谷 氨酸脱羧酶活性未见明显变化，GABA-T活性下降，PD对GABA影响的详细作 用机制尚不清楚。 神经递质释放到突触问隙后要与突触后膜上相应的受体结合才能发挥效应。 前，关于PD对GABA受体影响的研究未见报道。 乙体氯氰菊酯又名高效氯氰菊酯，是目前应用较为广泛的II型拟除虫菊酯农 药，本研究采用急性乙体氯氰菊酯染毒小鼠，应用高效液相色谱法对小鼠脑组织 氯氰菊酯的神经毒性及作用机制，为该类农药的中毒防治提供重要的理论依据。 材料与方法 一、动物分组、处理及样品采集 健康成年昆明种小鼠80只，体重18—229。按体重随机分为1个对照组及3 个染毒组，每组20只，雌雄各半。隔夜禁食后，染毒组小鼠以一次经口灌胃方式 用色拉油稀释受试物质，对照组给予等量色拉油。实验期间小鼠自由饮水、摄食。 室内温度22+2。C，相对湿度55+5％，保持动物室通风良好。分别于染毒后2h、4h 乙醚麻醉，在冰盒上迅速分离小鼠脑组织，一侧脑组织用于测定GABA含量，另 一侧脑组织用于测定GABA受体mRNA表达。再按上述同样方法，于灌胃后2h 测定脑组织GABA．T蛋白表达，每组6只小鼠。 二、观察指标及检测方法 (一)症状观察 染毒后连续观察并记录小鼠中毒症状、中毒表现的时间及死亡情况。 (二)GABA含量 参照文献应用丹磺酰氯柱前衍生高效液相色谱法测定脑组织GABA含量。 (三)GABA．T的蛋白表达 取小鼠脑组织采用免疫组织化学法测定GABA．T的蛋白表达，采用图像分析 系统对图像进行积分光密度(integtalopticaldensity,IOD)分析。 (四)GABA受体的mRNA表达 用TRIzo[试剂提取脑组织中的总RNA，按Real．timePCR试剂盒说明逆转录 并扩增，分析结果。 2 三、统计分析 计量资料用X+S表示，用SPSSl3．0统计软件进行单因素方差分析，组间两两 比较用LSD法，检验水准a=0．05。 娃 田 ：口 木 一、症状观察 80mg／kg剂量组全部小鼠于染毒lh后出现舔身、躁动、抓搔等症状；染毒2h 后陆续出现流涎、痉挛、步态不稳、共济失调等中毒症状，而后出现少动或行动 迟缓。40mg／kg剂量组个别小鼠于染毒2h后出现舔身、抓搔等症状。20mg／kg剂 量组小鼠在整个受试期问未见异常。实验期间无动物死亡。 二、GABA含量 染毒2h后，各组小鼠脑组织GABA含量随染毒剂量的增加而逐渐增加， 80mg／kg剂量