健康人群淋巴细BPDE-DNA加合物的修复差异与ERCC2XPD基因多态关联性的实验研究.pdf

·中文论著摘要· 健康人群淋巴细胞BPDE．DNA加合物的修复差异与 ERCC2／XPD基因多态关联性的实验研究 刖 吾 多环芳烃类化合物的典型代表。a(a)P在机体内经肝微粒体酶活化系统代谢活化 伤，可诱发皮肤癌、肺癌、直肠癌、胃癌、膀胱癌等多种癌症。 癌症是多基因、多因素参与，多阶段发展的复杂过程，是环境因素和遗传因 素共同作用的结果。在相同的环境暴露下，只有少数人会发生肿瘤，说明易感性 在肿瘤的发生发展中有着不可忽视的作用。有资料表明，DNA损伤修复能力的个 体差异是决定肿瘤易感性的重要因素，而个体DNA修复能力与DNA修复基因的 nucleotide 单核苷酸多态(Single cross 复交叉互补基因2(excisionrepaircomplementationgroup2，ERCC2)，又称为 着色性干皮病基因D(xeroderma D，XPD)，是一种重要的DNA pigmentsumgroup II H复合物的亚单位，是核苷酸 修复基因，它所编码的ERCC2／XPD蛋白，是TF Excision 切除修复(NucleotideRepair，NER)中的关键因子。在NER途径中，DNA II 损伤被特定的蛋白识别后，TFH复合物发挥其5’_3’DNA解旋酶作用，打开受 损位置的DNA双链，使受损DNA被特异性核酸内切酶切除，完成DNA损伤修 癌、食管癌、膀胱癌、头颈癌等多种肿瘤的易感风险密切相关，但结论不尽相同。 明显种族、地区差异。因此，健康人群DNA修复能力与ERCC2／XPD基因751、 312和156位点SNP的相关分析对中国东北地区汉族人群筛选肿瘤易感性位点有 重要意义，有助于阐明肿瘤发病机制，估计人群发病风险，找寻意义确切的肿瘤 易感生物标志，对于肿瘤的早期发现及合理治疗具有重要意义。 本研究以沈阳地区汉族健康人群为研究对象，提取外周血基因组DNA，检测 ERCC2／XPD (rs238406)位点的基因型，同时培养外周血淋巴细胞，用环境致癌因子B(a)P体外 诱导BPDE．DNA加合物的形成，采用高效液相色谱法和改良彗星实验精确评价 个体DNA损伤修复能力，分析ERCC2／XPD不同基因型和单体型对于DNA损伤 修复能力的影响，试图探讨环境致癌因子所致DNA损伤的修复能力的个体差异 与ERCC2／XPD基因多态及其表达的关联，找寻意义确切的肿瘤关联性生物标志 物，进而试图阐明基因．基因、基因一环境间的交互作用及其机制，为NER通路肿 瘤关联性生物标志物的研究提供科学依据。 研究方法 l、研究对象的确定 自2010年10月至2011年5月，收集沈阳市成年汉族健康人外周血818例， 填写简单调查问卷并记录人口学特征、既往病史、家族史及生活方式(吸烟、饮 酒)等一般状况。研究对象排除肿瘤、遗传性疾病、重度感染等疾病，告知研究 对象并签署知情同意书后实施研究计划。 2、个体淋巴细胞DNA损伤修复能力的评定 2．1BPDE—DNA加合物水平测定(高效液相色谱法)。 2．2B(a)P所致DNA损伤水平测定(改良彗星实验)。 3、淋巴细胞DNA修复能力与ERCC2／XPD多态性关联性分析 3．1 度及OD260／OD2so比值 3．2TaqMan@荧光实时定量PCR法检测ERCC2／XPD Lys751Gin(rsl3181)， 3．3ERCC2／XPD (rs238406)基因型在人群中的分布频率及连锁不平衡性分析 2 3．4DNA修复能力与ERCC2／XPD各位点SNP及单体型的关联分析 4、BPDE．DNA加合物损伤修复的多因素分析 5、ERCC2／XPD基因表达水平的分析