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双酚A 遗传毒性研究 中文摘要 中文摘要 目的：双酚A （bisphenol A, BPA ），是一种广泛使用的化工原料，添加BPA 可使塑料制品具有轻巧耐用、无色透明以及加强抗冲击性等特点，并有效防止水 果和蔬菜从内部侵蚀金属容器，所以BPA 成为制造聚碳酸酯、环氧树脂、食品包 装、牙科填充剂、食品罐头涂料和医疗器械等产品的重要原料。BPA 具有毒作用 剂量小、潜伏时间长等特点，对健康造成多种潜在危害，国内外许多学者对 BPA 的毒性作用进行了研究报道。目前对BPA 的毒性研究多集中在内分泌系统、生殖 系统、神经系统等方面，其遗传毒性还有待进一步研究。本实验通过体外染毒检 测BPA 对中国仓鼠卵巢细胞（CHO 细胞）的细胞存活率、DNA 的直接损伤作用、 微核率以及染色体畸变率，并通过Ames 试验检测BPA 的致突变性，通过将上述 检测不同遗传学终点的试验相结合探讨BPA 的遗传毒性。 方法：(1) 以仓鼠卵巢细胞（CHO 细胞）作为实验系统，选用四甲基偶氮唑 盐法（即MTT 比色法）检测不同浓度双酚A 对CHO 细胞作用不同时间后，对细 胞存活率的影响；（2 ）采用单细胞凝胶电泳试验（即SCGE 彗星试验），了解不 同浓度及不同作用时间下双酚A 对 CHO 细胞DNA 单链断裂的损伤程度；（3 ） 采用微核试验研究不同浓度双酚A 对CHO 细胞微核率的影响；（4 ）采用染色体 畸变分析检测不同浓度双酚A 对CHO 细胞染色体畸变率及诱导的主要畸变类型； （5 ）通过Ames 试验了解不同浓度双酚A 的致突变效应。 结果：（1）MTT试验结果显示，分别经12 h及24 h染毒处理后，当双酚A终浓 度为40µmol/L 时，CHO细胞的存活率显著高于阴性对照组。当浓度高于80µmol/L 时，细胞存活率呈现下降趋势，各染毒组吸光度值与阴性对照组相比均具有统计 学差异。 （2 ）单细胞凝胶电泳实验结果显示，经12 h及24h处理后，双酚A浓度高 于80 µmol/L时，可引起CHO细胞的拖尾率、尾部DNA百分含量及尾长增加。（3） 微核试验和染色体畸变试验表明，在双酚A处理24h后，当浓度高于100µmol/L时， CHO细胞的微核率和染色体畸变率显著增加。其中染色体畸变的类型以断裂、无 着丝粒断片和裂隙为主。（4）Ames试验检测的BPA染毒浓度为10µg/皿～5mg/皿共 九个剂量组，其结果为阴性。在活化和非活化条件下，与阴性对照组比较，可见 I 中文摘要 双酚A 遗传毒性研究 部分菌株的回变菌落数有所增加，但并无统计学差异。 结论: （1）外培养条件下，双酚A 在染毒浓度为40 µmol/L 作用 12h 后，可显 著刺激细胞的生长，表现出一定的刺激效应。从80 µmol/L 开始，染毒12h 对CHO 细胞的增殖有明显的抑制作用，表现出细胞毒性作用。（2）双酚A 可引起CHO 细 胞的拖尾率、尾部DNA 百分含量、尾长及Olive 尾矩增加。提示双酚A 可引起体 外培养的细胞产生DNA 的单链损伤。（3）双酚A 能显著增加CHO 细胞的微核 率和染色体畸变率。其中染色体畸变的类型以断裂、无着丝粒断片和裂隙为主。（4） Ames 试验未检测到双酚A 的致基因突变作用。在活化和非活化条件下，与阴性对 照组相比，可见部分菌株的回变菌落数有增加趋势，但并无统计学意义。提示双 酚A 可能并不存在致基因突变的作用。 关键词：双酚 A ；遗传毒性；单细胞凝胶电泳试验；Ames 试验；染色体畸变 试验；微核试验；中国仓鼠卵巢细胞 作 者: 蔺 瑶 指导老师: 田海林副教授 II 双酚A 遗传毒性研究