小鼠骨髓间质干胞生物学性状及应用可行性研究.pdfVIP

小鼠骨髓间质干细胞生物学性状及应用可行性研究 摘 要 干细胞是指具有高度增殖和自我更颓能力，并可分化为多种不同类型 组织细胞的一类细胞。f多年来，人们对骨髓的研究主要集中在造血干细胞 上，并取得了可喜的研究成果。近年，随着人们对干细胞可塑性认识的深 入，干细胞的外延被进一步扩展开来。例如，从肌肉分离的细胞能够重建 造血；骨髓中的一类非造血细胞的基质细胞，是中胚层来源细胞的干细胞。 ceUs)，已经在 这类来源于胚胎中胚层未分化的间充质细胞(Mesenchymal 体外成功培养出来。在培养体系中有关化学物质诱导下，它能够分化形成 至少7种组织细胞如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞、肌腱细 胞、星形细胞和骨髓基质细胞，所以又被称为骨髓问质干细胞(Mcsenchvm。l stem cells，MSCs)。 由于对MSCs研究的深入，MSCs所具有的潜在应用价值逐渐被人们认 识。通过自体或异体MSCs细胞移植进行细胞治疗，可以替代、修复或增 强受损间质组织器官生物学功能，许多目前难以治疗的如Alzheimcr}s病和 骨质疏松等困扰老年人的退行性疾病则可能迎刃而解。而在大面积烧伤和 粉碎性骨折等情况下，如果没有足够的修复细胞将造成愈合延迟：MSC。 具有分化形成多种结缔组织的潜能，是作为组织工程种子细胞的理想选择， 应用于组织工程相将加速严重创伤的愈合，减少伤残率。随着细胞的生长 与分化以及创伤与创伤组织修复的相关分子机制被进一步阐明，MSC。将 成为体外基因转染的理想载体。 如同多能造血干细胞的存在赋予骨髓组织强大的造血功能以维持血液 系统的新陈代谢一样，多潜能MSCs的存在为骨、软骨、肌肉等结缔组织 的损伤修复提供了潜在的修复细胞源泉。研究和利用MSCs可为创伤修复 提供一条新的途径。虽然MSCs在体外可诱导分化形成成肌细胞，但自体 翡雷髓MSCs是否能够参与俐伤时瓿肉缀织静修复与再生，现在还不清楚。’ 本蘧戆楚研究利蹋MSCs进行稍伤健愈顼裔静一部分，在建立小鼠骨髓 MSCs体井分离培养体系静鏊穑上，研究尾静弥移植的骨髓MSCs在翎伤小 躐体岗的分柱定位情况。 霭搦 ’， 本自晕凝采用密度为1．082豹缩艟分离液PercoU通过密度梯度分离小鼠的 肇令核鳃跑，利爨MSCs零糕赔壁靛特点，24小时肉换液去棒造赧细胞，分 褰培葬学髓MSCs。研究其在体外传代培养中的生长秘线、辩壁率及细胞周 期等缨腿生物学特点粳越微缭构，并遴过阑接手段——诱导淘成弱’细胞和成 赚缨魁分化来验涯分离获褥熬MSCs是甭其有多淘分纯瓣能力。f在纯基础 基因转染；以雄蛙BALB／C小鼠瓣原代幕】第1代MSCs鼓尾静脉输注，两次 移檀绘剑伤魏泰创伤的4,5Gyy射线全身照射鹃弱系瓣鼠，在各个时相点(1 删到2月)处死小袋，提取缀缀器害鹤DNA，翔PCR检测移稿罐褴，j、飘 MSCs蜓y-染色体，臻究移植豹MSCs在剑伤夺鼠体斑鹣定位分确i。 结果： 1、采月密度撵度离心和警期黠壁分离福缩会煞方法获霉了沈较均一的 置髓MSCs。在原{弋培葬过程中，MSCs受集落生长，传代瑶蹒均匀凳长： 传代培养的小鼠MSCs倍壤时阕为38夺魁，传我接瓣12小时90％戳上的 细胞没贴蹙，枣80％憋MSCs处予G0／GI勰。 2、钵终壤莠的嚣键间质睾缨腿，透射电镀鼹察葵脆浆较少缨穗嚣不发 达，腿核较大，以常染色质为主，核仁明显，偶尔还霹髭娃予分裂翳静缩 胞，袭现嫩早期细骢的特点。 3、体外壤养魄MSCs在地塞米松、§+磷酸营漓(§一GP)稳抗坏巍酸酌 联合诱导下。缨熙表达成爨缨魁熬标悫BMP耱ALP。 的诱导下，细胞逐濒变鲤，2-3周左蠢表现文脂糖纲溅黪特征，瞻浆中赉 现脂肪小漉，逐灏融会变犬，油终。染色阳性。 VIll 微镜下可见绿色荧光蛋白表达，表明外源基因已转入MSCs， 并整合到细胞中。 6、经过Y-染色体PCR检测，移植的MSCs可定位分夼于创伤小鼠的 骨髓、脾脏、肺和创伤部位肌肉，在未致伤小鼠定位于骨髓、脾脏和肺。 结论： 1、在本实验条件下，证实了骨髓中存在特殊的细胞成分MSCs，它具 有增殖形成多种间质组织细胞的能力。 2、创伤后移植的MSCs可能参与受损肌肉的