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山仔水华微囊藻毒素免疫毒性实验研究 中文摘要 目的： 研究山仔水华微囊藻毒素的特异性免疫毒性和非特异性免疫毒性并探讨其 部分免疫毒性机制。 方法： 1．山仔水华微囊藻毒素对体外培养小鼠免疫细胞的损害 察Mc—LR对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响：无菌取小鼠腹腔巨噬细胞，用 RPMI 平行作6孔，观察MC-LR作用24、48和72小时对小鼠巨噬细胞的毒性作用。 2．山仔水华微囊藻毒素对整体动物免疫功能影响的研究 四十只雄性清洁级ICR小鼠按体重随机分成四组，每组lO只，腹腔注射微 囊藻毒素0，8，16，24I-tgMC—LR／kg，连续7d。于第8d处死动物，取脾脏和胸 腺。用迟发型超敏反应(DTH)来观察微囊藻毒素对小鼠细胞免疫功能的影响，以 血清溶血素(HC50)观察微囊藻毒素对小鼠体液免疫的影响；碳廓清实验检测小 鼠巨噬细胞吞噬功能；胸腺和脾脏常规HE染色病理检查：用试剂盒检测脾脏超 酶(LDH)活力，来观察染毒小鼠脾脏氧化应激反应。 3．山仔水华微囊藻毒素对小鼠外周血白细胞和淋巴细胞亚群的影响： 四十只雄性清洁级ICR小鼠按体重随机分成四组，每组10只，腹腔注射微 囊藻毒素0，8，16，24FtgMC—LR／kg，连续7d。第8d处死动物，挖眼球取血。 自动血球分析仪检测白细胞的数量、分类及红细胞、血小板；流式细胞仪检测 CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的百分比， 结果： 1．山仔水华微囊藻毒素对体外培养小鼠免疫细胞的损害 1．1 MC-LR／ml剂量组脾脏的T淋巴细胞刺激指数SI显著下降，与对 l，5，lOptg Mc—LR／ml剂量组B淋巴细胞刺激指 照组比较有统计学意义(PO．05)：5，10 Pg 数SI显著下降，与对照组比较有统计学意义(PO．05)。 1．2染毒24小时各剂量组腹腔巨噬细胞的增殖能力与空白对照组比较无明显变 化，48小时以后各剂量组腹腔巨噬细胞增殖能力有不同程度的抑制，染毒48小 MC—LR／ml剂量组腹腔巨噬细胞增殖能力显著下降，染毒72小时 时5，lOpg 1，5，10ugMc—LR／ml剂量组腹腔巨噬细胞增殖能力显著降低，与对照组比较有 统计学意义(PO．05)，呈现一定的时间和剂量关系。 2．山仔水华微囊藻毒素对整体动物免疫功能影响的研究 24pgMC-LR／kg剂量组脾体比有降低趋势，2499MC—LR／kg剂量组胸腺明显萎缩， 与对照组比较有统计学意义(PO．05)：16，24p+gMC—LR／kg剂量组小鼠DTH明 显下降，24“g MC—LR／kg MC—LR／kg剂量组小鼠HC50明显下降(PO．05)，24pg 剂量组小鼠吞噬指数下降，与对照组比较有统计学意义(PO．05)。 2．2胸腺、脾脏病理检查发现，16，24pgMc—LR／kg剂量组胸腺皮质变薄，髓质 MC—LR／kg剂量组小鼠脾 区扩大，皮、髓交界模糊，皮质区淋巴细胞减少，24pg 小体明显缩小，淋巴细胞数减少。 2．3 SOD和GSH—PX活性显 24“gMC—LR／kg剂量组小鼠脾脏LDH水平明显升高， 著降低，与对照组比较有统计学意义(PO．05)。 3．山仔水华微囊藻毒素对小鼠白细胞和外周血淋巴细胞亚群的影响 MC—LR／kg齐U量组 各剂量染毒组小鼠外周血白细胞数量明显减少，16，24pg 淋巴细胞的比例下降，与对照组比较有统计学意义(PO．05)：各剂量染毒组对红 细胞、血红蛋白和血小板数量无明显改变；16，24“gMC—LR／kg剂量组CD4+T淋巴 细胞百分比显著下降，与对照组比较有统计学意义(PO．05)。 结论： 1．山仔水华微囊藻毒素可以明显抑Stj]j,鼠的DTH、HCSO和脾T、B淋巴细胞的增殖， 导致机体特异性免疫功能损伤；还可以降低小鼠的碳廓清吞噬能力和腹腔巨噬细