甲型肝炎病毒(Z-84株)基因组序列分析及基因分型.pdfVIP

甲型肝炎病毒(TZ-84株)基因组 序列分析及基因分型 。 J 转?L、 摘要 厶、。o’ 甲型肝炎病毒(HAV)TZ-84株是从河北唐山一位甲型肝炎 病人的粪便中分离的，适应于人胚肺二倍体细胞2BS株。目 前已研制成功甲型肝炎灭活疫苗，成为生产用毒种。通过异 硫氰酸胍法提取病毒RNA，经反转录聚合酶链式反应(RT—FCR) 扩增基因组片段，制备克隆，得到了包含全基因组(nt25- 定，TZ-84株基因组序列长度为7477个核苷酸，其中5、非编 码区核苷酸长度为733个核苷酸；开放读码框架长度为6681 个核苷酸，编码2227个氨基酸；3、非编码区预测为63个核 苷酸。根据国际标准，通过对VPl／2A区段168个核苷酸 (nt3024—3191)分析，确定Tz一84株属于IB基因亚型，表 明中国既有IA基因型的流行，也有IB基因型的流行。Tz一84 株与其它HAV株同源性很高，这是HAV只有一个血清型的分 子基础；TZ-84株与HMl75株核苷酸序列和氨基酸序列的同 源性均为最高，分别为96．9％和98．4％。Tz-84株的5、NTR中 ntl52处有一个核苷酸的变异，A—卜G，这是HAV适应细胞 的标志；TZ-84与ttMl75株比较，有35个氨基酸变异。灭活 疫苗所用毒种代次(26代)与早代病毒(4代)在nt2933～ 导致了1个氨基酸改变(aa744，谷氨酸◆甘氨酸)，说明 Tz一84株HAV遗传稳定性是比较高的，但在适应细胞培养的 传代过程中有一定的核苷酸和氨基酸变异。 关键词：甲型肝炎病毒，反转录聚合酶链式反应(RT—PCR)，TZ一 84株，基因型 S仃am)Genome AVtrus(TZ-84 Hepatitis and Genotype Sequence Abslract A strainwild wasisolated type virus(HAY)TZ一84 Hepatitis an to fromoutbreakin city,Hebei Tangshan province，adapted inhuman hasbeenused propagate diploidceils(2Bsstrain)，and to Avirusvaccinein inactivated China．Twelve produce hepatitis obtained clonedcDNAwas reverse through transcription HAV fromthevirusharvest RNA，extracted PCR(RT—PCR)usillg the ofacid by singlestep guanidiumthiocyanate-·phenol--