甲醛诱导PC1细胞凋亡及坏死的研究.pdfVIP

甲醛诱导PC12 细胞凋亡及坏死的研究 研究生：李 瑛 导 师：让蔚清 教 授 专 业：卫生毒理学 中文摘要 目的：观察甲醛诱导PC12 细胞的损伤特征，进一步研究甲醛诱导PC12 细胞损 伤剂量范围，为预防和治疗神经系统相关统疾病提供一定的实验依据。 方法：采用不同浓度的甲醛 ， ， ， ， 与 细胞株共培养 (0 20 40 80 160µM) PC12 (24h) 建立细胞实验模型，以 过氧化氢为阳性对照组，氨基胍 一种 选择 100µM ( iNOS 性抑制剂 为保护组。 荧光染色法检测细胞凋亡；四唑盐 法 ) Hoechst33258 (MTT) 检测PC12 细胞的生长活性；分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量；硝酸还 原酶法检测细胞上清液中NO 的含量；生化法检测NOS 的活性和iNOS 活性； Annexin-FITC/PI 双染、流式细胞仪分析细胞死亡情况； Western blot 检测不同浓 度甲醛诱导PC12 细胞凋亡过程中procaspase-3 蛋白表达情况。所有数据均用均 数 标准差 X ±S 表示，结果采用 进行统计处理。 ± ( ) SPSS13.0 结果：不同浓度的甲醛 ， ， ， ， 处理细胞 ，甲醛呈浓度依赖 (0 20 40 80 160µM) 24h 性的诱导PC12 细胞的形态学损伤和凋亡；抑制细胞生长活性；促进细胞乳酸脱 氢酶漏出，乳酸脱氢酶漏出呈现两个剂量特点：小于40µM 甲醛组的细胞上清液 LDH 漏出量与对照组比较稍有下降，大于40µM 甲醛组的细胞上清液LDH 漏出 量升高；随着甲醛染毒浓度增加，细胞培养液中NO 含量和细胞内NOS 及其亚 型 iNOS 的活性表达逐渐升高；Annexin-FITC/PI 双染、流式细胞仪检测细胞凋 亡率发现：低剂量甲醛(80µM)主要诱导凋亡，高剂量甲醛(80µM)主要引起细 胞坏死；Western blot 结果显示，随着甲醛浓度的增加，procaspase-3 蛋白酶原表 II 达逐渐增强。 AG 保护组能明显减轻细胞形态学损伤；降低细胞生长抑制率；减少乳酸脱 氢酶漏出量；细胞培养液中NO 含量和胞内NOS 及iNOS 活性也明显降低；同 时也降低细胞死亡率；减少了caspase-3 蛋白酶原表达。 结 论： 1. 甲醛在低浓度范围（小于 ）诱导细胞凋亡，高浓度范围大于 80µM ( 80µM) 诱导细胞坏死。 2. 甲醛诱导PC12 细胞损伤可能与iNOS 活性增高，产生过量的NO 有关， 的特异性抑制剂 减少 的增多；甲醛诱导 细胞凋亡可能与 iNOS AG NO PC12 caspase-3 途径有关。 关键词：内源性甲醛； 细胞；一氧化氮合酶；一氧化氮；