肌醇六磷酸通过I3KAkt信号通路对结肠癌HT-29细胞生长的影响.pdfVIP

摘要 目的：通过研究PI3K/Akt信号通路在肌醇六磷酸(inositol hexaphosphate,IP )抑制结肠 6 癌HT-29细胞生长中的作用，探讨IP 诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的机制。 6 方法：1.体外培养结肠癌HT-29细胞，使用不同浓度的IP （0μg/mL，50μg/mL，100μg/mL、 6 200μg/mL、400μg/mL ）进行干预，并依此浓度分组，干预24 h和48h 。 2. MTT 法检测不同浓度的IP （0μg/mL，50μg/mL，100μg/mL、200μg/mL、 6 400μg/mL）对结肠癌细胞分别干预24h和48h生长抑制作用效果。 3. 应用流式细胞仪技术，采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测不同浓度IP6 组对结肠癌细胞干预48h后的细胞凋亡率。 4. Western-blot检测PI3K 、pAkt 、Akt和caspase-9蛋白的表达情况。 5.Real-time PCR检测PI3K 、Akt 、caspase-9、mTOR和NF-κ B mRNA 的表 达情况。 结果： 1.随IP 干预浓度的增加和时间的延长，IP 对HT-29细胞生长的抑制作用 6 6 逐渐增强且有显著的时间-剂量依赖性。 2.HT-29细胞经IP 作用48h后,随着IP 浓度的增加，HT-29细胞的凋亡增加， 6 6 且IP 主要诱导HT-29细胞发生早期凋亡。 6 3.在IP 干预48h后，随着IP 干预浓度的增加，PI3K,Akt及pAkt 的表达逐渐 6 6 降低，并呈浓度依赖性（P ＜0.05 ）,随着IP 浓度的增加，caspase-9表 6 达逐渐增加，呈浓度依赖性（P ＜0.05 ）。 4.在IP 干预48h后，随着IP 干预浓度的增加，PI3K 、Akt和mTOR 的mRNA 6 6 的表达逐渐降低，而NF-κ B及caspase-9的mRNA表达逐渐增加（P ＜ 0.05 ）。 结论： 1.IP 能够抑制HT-29结肠癌细胞的增殖，并呈浓度依赖性。 6 2.IP 能够诱导HT-29结肠癌细胞凋亡。 6 3. IP 对HT-29结肠癌细胞PI3K/Akt 信号通路的作用中有：下调了PI3K 6 及Akt 的表达，抑制了Akt 的磷酸化过程，上调了caspase-9 的表达，下 调了通路下游mTOR和NF-κ B 的表达，从而发挥了诱导细胞凋亡的作