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《植物生理学研究法》 (课程实习) 论文题目：秋海棠和一串红对水分胁迫下的生理响应 目 录 一、实验设计方案 ---------------------------3 二、实验预习报告----------------------------------4 实验一 植物组织中过氧化氢含量的测定 实验二 蒽酮法法测定可溶性糖 实验三 植物细胞膜透性的测定（电导仪法） 实验四 植物叶片水势测定 实验五 植物组织游离脯氨酸含量的测定 实验六 叶绿体色素的定量测定一、《植物生理学研究法》实验设计方案（10分） 论文题目 不同盆栽鲜花对水分胁迫的生理响应 小组成员 选 题 依 据 及 实 验 设 计 选题依据： 水是植物生活环境中最重要的条件之一，植物的一切正常活动都只有在有水的条件下才能进行，否则就会收到阻碍，甚至死亡。水是原生质的主要成分，直接参与植物体内重要的代谢过程，是各种生化反应和物质吸收、运输的良好介质。在一定的水分胁迫的强度下，多数植物能够进行和抗旱有关的基因表达，随之产生一系列的形态，生理生化以及生物物理等方面的变化，植物叶片组织的相对含水量、细胞膜相对透性、还原糖含量、可溶性蛋白含量等都会发生相应的变化.现以秋海棠和一串红为材料，比较在水分胁迫下，二者的生理反应。 实验设计： 准备秋海棠和一串红各25株，将秋海棠分为5组，编号1、2、3、4、5，每组5株；将一串红分为5组，编号6、7、8、9、10，每组5株。首先将这10组植株灌水平衡处理2天。此后，1、6组连续灌溉10d，2、7组连续灌溉8d，3、8组连续灌溉6d，4、9组连续灌溉4d，5、10组连续灌溉2d。每次灌水量都确定为120mL。12天后取样，在每个梯度中，每次检测重复3次，取平均值，从而检测植物叶片组织的相对含水量、叶片水势、细胞膜相对透性、可溶性糖含量、叶绿体色素含量、游离脯氨酸含量和过氧化氢含量七个生理指标对水分胁迫的响应。实验结束后将秋海棠和一串红的结果进行对比，分析两种盆栽花卉对水分胁迫响应的差异。 参考文献： 【1】邹琦.植物生理学实验指导.中国农业出版社，2010-1，(7),18-165. 【2】李合生.现代植物生理学.高等教育出版社，2006-7，（2），37-70 需 要 测 定 的生理 指 标 及方法 实验一 过氧化氢含量测定（盐酸钛检测法） 实验二 可溶性糖含量的测定（蒽酮检测法） 实验三 细胞膜相对透性的测定（电导仪法） 实验四 叶片水势测定 实验五 游离脯氨酸含量测定（茚三酮显色法） 实验六 叶绿体色素定量测定 实验七 叶片组织相对含水量的测定（烘干法） 指导老师对实验设计方案的意见： 指导老师签名： 年 月 日 3.预习报告 实验1 植物组织中过氧化氢含量的测定 （一）原理 植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除H2O2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此，植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量。 H2O2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H２SO4溶解后，在415nm波长下比色测定。在一定范围内，其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。 （二）植物材料： 一串红叶片和秋海棠叶片 （三）仪器设备 研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；10mL试管30只；离心机；分光光度计。 （四）试剂配制 100μmol/L H2O2丙酮试剂：取30%分析纯H2O2 57μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（W/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。 （五）实验步骤及注意事项 1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。 表40-1 测定H2O2浓度标准曲线配置表 试剂（ml） 离 心 管 号 1 2 3 4 5 6 7 100μmol/L H2O2 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 4℃下预冷丙酮 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 5%硫酸钛 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 浓氨水 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 ? 3000r/min 离心10min，弃去上清夜，留沉淀 2mol 硫酸 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 待沉淀完全溶