蛇石足杉内生真菌Slf-14及其藜蒿中黄酮苷类化学成分的分析.pdf

摘 要 l f-1 第一部分内生真菌S 4发酵培养及其化学成分研究 蛇足石杉(Huperziaserrata)，又名救命王、干层塔、蛇足草，属石松目石杉 科石杉属多年生草本蕨类植物，是一种传统中草药。其植物组织内存在大内生真 菌。研究表明，内生真菌Slf-14发酵培养能产生石杉碱甲等生物碱化学成分，对 乙酰胆碱酶具有可逆，高效，高选择性的抑制活性，其发酵培养条件：培养基为 PD培养基，培养量为150mL，培养温度为28℃，培养速率为120r／min。发酵培 养产生菌丝体和发酵液，分别用石油醚、氯仿与乙酸乙酯依次萃取，得到石油醚 萃取部分、氯仿萃取部分与乙酸乙酯萃取部分，以硫代乙酰胆碱(ATCh)为底物， 5，5．二硫代．2．硝基苯甲酸(DTNB)为显色剂，通过DTNB显色法检测其菌丝体与 发酵液不同萃取部分乙酰胆碱酯酶抑制活性。结果表明菌丝体氯仿萃取部分抑制 活性最高。采用紫外分光光度法，以氯仿为参比，检测波长为313nln，测定内生 真菌Slf-14菌丝体中总生物碱含量。 为进一步阐明内生真菌Slf-14菌丝体乙酰胆碱酯酶抑制活性的物质基础和 作用机理，本研究采用乙醇提取，分布多次萃取和反相硅胶柱层析等多种柱层析 法对菌丝体氯仿萃取部分进行多次分离纯化和结构鉴定研究，得到其中的主要化 学成分。 本研究首次对内生真菌Slf-14发酵产生的菌丝体与发酵液的不同萃取部分 对乙酰胆碱酶的抑制活性进行筛选与研究，确定了菌丝体萃取部分的乙酰胆碱酶 抑制活性最高，并对其进行分离纯化与初步化学成分研究，为具体阐明乙酰胆碱 酶抑制活性的物质基础与作用机理提供了初步理论依据。 第二部分藜蒿中黄酮苷类化学成分研究 藜蒿(ArtemisiaselengensisTurcz)学名萎蒿，是菊科蒿属多年生草本植物，其 植物组织内含有大量的黄酮类物质，具有降低心肌耗氧量、使冠脉和脑血管流量 增加、降血糖和血脂等作用及具有清除人体中超氧离子自由基、抗衰老、增强机 体免疫力等生理活性。为了进一步阐明藜蒿中所含黄酮苷类化合物的化学结构， 对鄱阳湖野生藜蒿中黄酮苷类化合物进行分离纯化和结构鉴定研究，采用超声波 辅助溶剂提取法提取藜蒿中的化学成分，并通过聚酰胺柱层析法分离藜蒿中的黄 LH．20葡聚糖凝胶柱色谱法分离纯 酮苷元与黄酮苷类化合物以及采用Sephadex 化藜蒿中的黄酮苷类单体化合物，根据化合物的理化性质和波谱特征鉴定化合物 的化学结构。研究表明，藜蒿提取物中的黄酮苷元和黄酮苷类化合物得到较好的 分离，同时分离并鉴定了两个黄酮苷类的单体化合物，分别为柯依利素．7…O D． 13 葡萄糖苷和槲皮素．3．O．B．D．木糖苷。 本实验采用超声波辅助溶剂提取并结合聚酰胺柱层析可以充分提取并有效 LH．20凝胶柱 分离藜蒿提取物中的黄酮苷元和黄酮苷类化合物，采用Sephadex 色谱分离法可以分离制备藜蒿黄酮苷类单体化合物，可以将黄酮苷类单体化合物 作为相关产品的质量控制标准，也为藜蒿的化学成分及生理活性研究提供物质基 础和理论依据。 关键词：蛇足石杉：内生真菌Slf-14；抑制乙酰胆碱酶活性；化学成分；凝胶柱 层析；分离与纯化；藜蒿；黄酮苷类化合物 V Abstract onfermentationofa Shiraia from PartOne：Studies endophyticfungi sp．Slf-14 serrataandits Huperzia components knownaS towerandSheZu serrata，also Huperzia help·king，melaleuca graSs，